天津天士力集团研究院药理所
文件编号：
常用免疫组织化学染色方法
一、ABC法：注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行1切片经二甲苯Ⅰ5分钟。2切片经二甲苯Ⅱ5分钟。3无水酒精Ⅰ30秒。4无水酒精Ⅱ30秒。595酒精Ⅰ30秒。695酒精Ⅱ30秒。790酒精30秒。880酒精30秒。970酒精30秒。10自来水洗。后面的切片脱蜡至水一般都是1101103H2O2甲醇处理切片1020分钟。12水洗。13抗原修复。14PBS洗3次，1分钟次。15加入血清孵育20分钟。16摔干血清，加入一抗60分钟。17PBS洗3次，2分钟次。18加入二抗孵育30分钟。19PBS洗3次，2分钟次。20加入ABC复合物，孵育30分钟。21PBS洗3次，2分钟次。22DABH2O2孵育切片510分钟。23PBS洗，水洗。24Harris苏木素染核510分钟。25水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。二、LSAB法。SP法Labelledstreptavidimbiotl
1切片脱蜡至水。
1
f天津天士力集团研究院药理所
文件编号：
203H2O2甲醇处理切片1020分钟。3水洗。4抗原修复。5PBS洗3次，1分钟次。6加入血清孵育10分钟。7摔去血清，加入一抗孵育3060分钟。8PBS洗3次，每次2分钟。加入二抗，孵育20分钟。9PBS洗3次，每次2分钟。10加入SP复合物孵育2030分钟。11PBS洗3次，每次2分钟。12DABH2O2孵育510分钟。13PBS洗，水洗。14Harris苏木素染核510分钟。15水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。三真空负压LSAB法1切片脱蜡至水。203H2O2甲醇真空负压处理5mi
3水洗。4如果需要，可进行抗原修复。5PBS洗3次，每次1分钟。6加入正常血清真空负压处理5mi
。7摔干血清，加入第一抗体，真空负压处理5分钟。8PBS洗3次，每次2分钟。9加入二抗即连接抗体真空负压处理5分钟。10PBS洗3次，每次2分钟。11加入链卵蛋白复合物，真空负压处理5分钟。12PBS洗3次，每次2分钟。13DABH2O2孵育510分钟。14PBS洗，水洗。
2
f天津天士力集团研究院药理所
文件编号：
15染核，分化，蓝化，脱水，透明并封固。注：真空负压即将真空干燥中抽成真空。负压达667KPa500mmHg四E
visio
TMSystems1切片脱蜡至水。203H2O2甲醇处理切片10分钟。3水洗。4抗原修复。5PBS洗3次，每次1分钟。6加入一抗体孵育3060分钟。7PBS洗3次，每次2分钟。8加入增强剂孵育2030分钟。9PBS洗3次，每次2分钟。10加入酶标抗兔鼠，复合物，孵育2030分钟。11PBS洗3次，每次2分钟。12DABH2O2孵育510分钟。13PBSr