流式细胞仪检测细胞周期操作步骤
取对数生长期的A549细胞，按1×106cellsmL以1mL接种于100mm培养皿内
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24h后，进行所需的处理（比如加药照射）
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特定时间后终止培养，进行下一步的实验
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收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入15ml离心管中
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1000rpm离心5mi
（短时低速离心）
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弃上清，用15ml预冷PBS，1000rpm离心5mi
后去除PBS和细胞悬液内的细胞碎片
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加入15ml预冷PBS在涡旋状态下加入35ml无水乙醇，混匀后，于4℃固定30mi
或20℃长期保存。
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1000rmi
离心5mi
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f将乙醇吸除，加PBS清洗混匀
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1000rmi
5mi
再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去
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吸除离心管内PBS，加入200ulPBS和2ul的RNA酶（025mgml）37℃下孵育30mi
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加入05ml的50ugml的PI溶液室温下避光染色30mi
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将离心管内的细胞过滤300um尼龙网膜至含有PBS的EP管中（PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP管
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开机（先开仪器后开软件）
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流式细胞仪的结构一般分为5部分：①流动室及液流驱动系统；②
激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、
显示、分析系统；⑤细胞分选系统。
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检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上
f↓
流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱
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液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488
m激发光源）
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荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞DNA分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例）
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在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出
结果分析Modfit软件分析
ffFlowjo软件分析
图片拷贝：直接CtrlC
fFCMDNA量分析1个细胞增殖群时，可将DNA含量分布组方图分为三部分，即G01、S、G2M。G01和G2M细胞峰的DNA分布均为
f正态分布，S期可以认为是一个加宽的正态分布
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检测结果刻录光盘保存
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关机（先关软件后关仪器，关机前需清洗）
正常细胞DNA含量：2
4
凋亡细胞：核内DNA断裂，乙醇固定后膜通透性增加，小片段DNA
穿膜丢失，胞内DNA含量减少。PI染色后，荧光强度减小而形成一个DNA含量小于2
的分布区（亚G1峰）。
f1、纵坐标CellNumber：即计数的有效细胞数；2、横坐标DNACo
te
t：即DNA含量；3、G1、G2、S三期在图中已经标示；
4、右侧数字含义：DipG15384at5556，即G1期DNA含量平均值为5556；5384即G1期细胞数占总数的5384；DipG2564at10772，即G2期DNA含量平均值为10772，56r