氨基酸总量的测定茚三酮比色法
一、方法原理：氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，可产生二酮茚一二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色深浅与氨基酸含量成正比，据此可以比色测定氨基酸含量。二、试剂：1．2％茚三酮溶液：1g茚三酮C9H4032H2O溶于25ml热水中，加入40mg氯化亚锡；S
Cl22H2O，搅拌溶解，滤去残渣，滹液放在冷暗处过夜，用水定容为50ml，保存声冷暗处。如茚三酮有微红色，配成的溶液也带红色，将影响比色测定，需将茚三酮重结晶后再用方法是：取5g茚三酮溶于20ml热水中，加入02g活性炭，轻轻摇动，放三十分钟后过滤，滤液置冰箱中过夜，次日过滤，用1ml冷水淋洗结晶，然后放在干燥器中干燥，装瓶保存。2。磷酸盐缓冲液pH80：①1／15moll磷酸二氢钾溶液：取KH2P0409070g溶于lOOml水中。②1／15moll磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠Na2HP0412H2023876g溶于水，加水至1000ml。取①50ml与②95ml混匀即得。3．10％醋酸：取lOml冰醋酸加水至lOOml。4，氨基酸标准溶液200ppm：称取干燥的氨基酸白氨酸，或其它的氨基酸02000g溶解于水，定容为1000ml。三、仪器：水浴，721分光光度计。四、操作步骤：一标准曲线绘制：分别吸取氨基酸标准溶液200ppm0、05、10、15、20、25ml各置于25ml容量瓶中加水补充至40ml，各加入缓冲液lml，加入茚三酮lml，摇匀。置沸水浴中加热15分钟，取出迅速冷却至室温，用水定容。放置15分钟，在570
m波长下测定，绘制标准曲线。氨基酸浓度分别为0，40，80，120，160，20Oppm。二样品测定：l提取样品：称取1020g植物样品新鲜样或干样，加5m110％醋酸，在研钵中研碎，用水洗移入lOOml容量瓶，水定容，过滤到三角瓶中，取滤液测定。2．样品液测定：移取样品待测液l4毫升，放人25ml容量瓶中，加水至4Oml，加缓冲液1ml，加茚三酮1ml，摇匀。置沸水浴中加热15分钟，取出用冷水迅速冷却至室温，加水定容。放置15分钟后，测定。同时测定待测液空白值，扣除空白值后，从标准曲线上查得氨基酸的浓度。五、结果计算：氨基酸总量mg％ppml0025100WV1000
ppm250WV
式中：ppm由标准曲线查得样品测定液氨基酸浓度；W称样品重gV吸取样品待测液体积ml
六。注意事项：
f1．配制茚三酮溶液的茚三酮和S
Cl2都应该用五色晶体，配成的溶液一般应在10天内用完。2．应控制反应溶液的pH才能得到重现性好的结果，反应液pH在6264之间为宜，所加试液和缓冲液的量的比例可为2：1或1：1。3．要控r