细胞，当细胞融合度达到80时，即可传代；237℃水浴预热完全培养基；3在超净台中，弃掉T25细胞培养瓶中的培养基，加入2mlPBS清洗，再加入1ml025胰酶EDTA消化细胞；
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4在显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，即可加入5ml完全培养基终止消化；5用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；6将细胞转移到15ml离心管中，1000rpm离心5mi
；7弃上清加入1520ml的完全培养基重悬细胞后转入T75细胞培养瓶中或按适当比例传到T25细胞培养瓶中。确保后融合度在2550之间，细胞密度在1×10cellscm（25×10cellsT25瓶），混合细胞悬液，确保细胞均匀分布；8将细胞培养瓶置于37℃，5CO2的无菌恒温培养箱中培养；9每两天用新鲜、预热的完全培养基进行换液。
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【冻存】
1细胞消化和计数，用胰酶对待冻存的细胞进行消化，并对细胞进行计数。21000rpm离心5mi
，去掉上清。3根据细胞计数的情况，加入适量的冻存液，使细胞密度在1×10ml左右（或根据自己希望达到的细胞密度）。4轻轻地重悬细胞（务必重悬均匀），将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管（需提前做好标记或者贴上标签）中，旋紧冻存管盖。5将冻存管放入程序降温冻存盒中，然后将冻存盒直接放入80℃。6第二天将细胞从80℃转移到液氮中。
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