反相高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因的含量
前言：本次实验报告在前言中简单阐述HPLC基本原理，介绍HPLC仪器的结构
特点和应用范围；研究对象的化学结构、理化常数和文献报道测定方法。
咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称137三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因12－18％，茶叶约含20－47％。可乐、APC药片中均含有咖啡因。其分子式为C8H10O2N4，结构式：
一、仪器与试药
O
CH3N
NCH3
ONNCH3
高效液相色谱仪（日本岛津）。
咖啡因对照品；甲醇为色谱纯；百事可乐（康师傅乌鲁木齐饮品有限责任公
司）；红牛（红牛维他命饮料有限公司）；叶尔羌茶（新疆叶尔羌茶有限责任公司）。
二、方法与结果
21色谱条件色谱柱：C18（46x150mm，5m），流动相：甲醇水3070，
测定波长280
m，柱温30℃，流速：1mlmi
，进样量：10μL。
22系统适用性实验取供试品20L进样，记录色谱图，咖啡因峰的保留
时间为4253mi
，各峰与相邻峰的分离度为，拖尾因子为，符合药典
规定，理论塔板数按咖啡因峰计算大于2000。对照品及供试品的色谱图如下：
⑴对照品的色谱图
f4300
mVDetectorACh1280
m
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
14981610
5112
5
0
00
10
20
30
40
50
60
70
80
90
mi

⑵供试品的色谱图
4342
mV14DetectorACh1280
m13121110
9876543210
1518
5102
08002158
2328
00
10
20
30
40
50
60
70
80
90
mi

23溶液制备精密称取咖啡因对照品10mg，加甲醇定容至10ml。吸取上述溶液05ml，
加甲醇稀释到10ml，则溶液浓度为50gml。供试品溶液：
f⑴百事可乐：取30ml的可乐放入烧杯中，用超声波脱气15mi
，驱赶饮料中的二氧化碳，用移液管精密移取1ml的可乐脱气饮料，用水稀释至10ml。
⑵红牛饮料：用移液管精密移取1ml的红牛饮料，用水稀释至10ml。⑶取一包叶尔羌红茶，取50ml沸水浸泡1小时，后取该溶液1ml用水稀释至25ml。24方法学考察241线性范围考察分别量取贮备液5个以上浓度的样品，置于10ml容量瓶，稀释至刻度，得到对应的浓度系列标准溶液。取上述系列浓度溶液经022m的微孔滤膜过滤，进样，得系列浓度对应峰面积和保留时间。以标准溶液的质量浓度（X）为横坐标，色谱峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，其线性方程为：YaBX（请将下图中的线性方程在此写出），相关系数为r09988，表明咖啡因在0494524725浓度范围内线性关系良好。
表1标准曲线
编号
1
浓度（单位）4945
峰面积r