沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管
内,振摇试管或反复吹打混合均匀,制成1100的稀释液。
3、另取1mL灭菌吸管,按上项操作顺序,制10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次即换用1支1mL吸管
4、根据标准要求或对污染情况的估计,选择2~3个适宜稀释度,分别在制作10倍递增稀释的同时,以吸取
该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中,每个稀释度做两个平皿。同时分别取1ml稀释液(不含样品)加
入两个灭菌平皿内作空白对照。
5、稀释液移入平皿后,将冷却至46℃琼脂培养基注入平皿约15~20ml,并转动平皿,混合均匀。
6、待琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃温箱内培养48±2h,水产品30±1℃温箱内培养72±3h。如样
f品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4毫升),凝固后培养。
(二)菌落记录方法做平板菌落数记录时,可用肉眼观察,必要时用放大镜检查,以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后,求出
同稀释度的各平板平均菌落数。到达规定培养时间,应立即计数。如果不能立即计数,应将平板放置于0~4℃,但不要超过24h。
1、平皿菌落数的选择选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿,大于300的可记为
多不可计。2、其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若
片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,则可以计算半个平板后乘以2,以代表一个平板的菌落数。3、当平板上有链状菌落生长时,如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,则应作为一个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链均应按一个菌落计算,不要把链上生长的每一个菌落分开计数。(三)菌落总数的计算
1、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)中菌落总数结果。
试样例次
102
稀释度103
104
选定计数稀释度
菌量个g或mL
1
380
52
18
103
52x104
2平
526
均
3菌
271
4落
284
数
5
26
205
32
60
12
152
37
12
5
103104(156)
102
(22)
102,103
102
26x105
27x10490x10426x103
6
无法计数
568
312
104
31x106
f2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,应以两者比值决定。若其比值小于2,应报告两者的平均数;若大于等于2,则报告稀释度较小的菌落数。
试样例次
102
稀释度10r