试剂提供:磁珠试剂1、Huma
i
flammatorycytoki
escapturebeadsA1A608ml管,6管
抗体包被的磁珠时间长了会有沉淀,用前斡旋35秒
2、CytometerSetupBeadsD15ml校正起始仪器PMT电压和补偿参数设置。每次使用50ul
抗体及标准试剂1、Huma
I
flammatoryCytoki
esPEDetectio
Reage
tB4ml
PE包被的人6种炎症因子抗体,每次试验用50ul
2、Huma
I
flammatoryCytoki
esSta
dardsC:2个瓶,02ml的冻干粉瓶两个瓶,包含了冻干的人重组蛋白,每个瓶用2mlAssayDilue
t稀释准备母液标准品。重悬之后,在28℃稳定,12小时内使用。
3、PEPositiveCo
trolDetector(E1):1瓶,05ml每次使用50ul用于CytometerSetupBeads来设置最初仪器补偿参数。
4、FITCPositiveCo
trolDetector(E1):1瓶,05ml每次使用50ul用于CytometerSetupBeads来设置最初仪器补偿参数。
缓冲液Buffer试剂1、WashBufferF:260mlPBS1×
用于洗涤及重悬洗涤过的磁珠
2、AssayDilue
tG30ml瓶用于重组和稀释人炎症因子标准品以及稀释测试样本
3、SerumE
ha
ceme
tBufferH10ml当检测血清或血浆标本时,用于稀释混合后的捕获磁珠(CaptureBeads)
f准备人炎症因子标准品:1、打开一瓶冻干粉的炎症因子标准品,转移标准品白色微球到一个15ml的聚丙
烯管中,标记上“母液”。2、加入2mlAssayDilue
tG溶解重建。在梯度稀释之前,先使得溶解的母液保
持均衡15分钟。只能用枪微混匀,不能vortex及剧烈吸取。3、标记用于梯度稀释的流式管,标记后每管加入300ul的AssayDilue
tG
5000,2500,1250,625,3125,156,80,40,20,104、梯度稀释:
从母液中吸取300ul的稀释液加入标记5000的稀释管中,打掉枪头,混匀组分,然后从中再吸取300ul加入标有2500的管中,打掉枪头,再次混匀,再从中吸取300加入1250标记管,打掉枪头,混匀,加入下一管。依次进行。
准备人炎症因子捕获磁珠(样本为血清血浆):1、计算试验管的数目:包括标准品和对照
例:8个血清样本,9个标准稀释液,1个阴性对照(可以不要),共17个管。考虑每次可能产生气泡等损失,因此,多算一个管,即18个标准品管数血清标本数1总管数2、剧烈vortex每一个捕获磁珠悬液管(A1A8)数秒。3、混合磁珠悬液:每个试验加入10ul磁珠悬液,如18次试验,则加入A1A8各180ul加入到一个新的流式管中,标记“mixedcapturedbeads”4、Vortex加入的8种悬液。5、离心200g5分钟6、小心吸取上清,丢弃(计算上清的量)7、用等量的SerumE
ha
ceme
tBuffer重悬混匀磁珠,完全vortex8、室温、避光孵育30分钟混匀的捕获磁珠现在准备转移到试r