Lipo2000瞬时转染细胞步骤
StealthRNAiorsiRNATra
sfectio
以24孔板为例，其余规格的转染见表1
1中板，细胞密度为3050适宜。
注意：根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度，如果转染后需要长时间后检测，则细胞中板密度适当降低，已避免细胞过度生长导致存活降低。2第二天（2436小时后）每个孔转染方式如下：A将20pmolsiRNA溶于50ulOptimem无血清培养基中。B将1ullipo2000溶于50ulOptimem无血清培养基中，混匀室温放置5mi
。C将AB两管混合，放置20mi
。3转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，46小时候换成有血清培养基。
PlasmidDNATra
sfectio
DNAuglipo2000ul123转染时细胞密度越高，转染效率，表达效率也越高，并且可以降低细胞毒性。1中板。
贴壁细胞：052X105cellswell，第二天待细胞密度达到7080时转染
悬浮细胞：48X105cellswell，中板后随即转染。2转染。A将08ugDNA溶于50ulOptimem无血清培养基中。B将2ullipo2000溶于50ulOptimem无血清培养基中，混匀室温放置5mi
。C将AB两管混合，放置20mi
。转染期间，将24孔板培养基换成无血清培养基，每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中，46小时候换成有血清培养基。
fTable1CultureSharedreage
tsDNAtra
sfectio
RNAitra
sfectio

中板密度CultureSurf
VolofVolofDNA
LipofecRNA
Lipofec
vesselareaperplati
gdilutio

tami
e
tami
e
well
mediummedium
2000
2000
10001000096well03cm2100ul
2X25ul02ug
05ul5pmol025ul
cellwell
052X10524well2cm2
500ul
2X50ul08ug
20ul20pmol10ul
cellwell
13X105
12well4cm2
1ml
2X100ul16ug
40ul40pmol20ul
cellwell
23X105
6well10cm2
2ml
2X250ul40ug10ul100pmol5ul
cellwell35mm
810X105
60mm20cm2
4ml
2X05ml80ug20ul200pmol10ul
celldish
23X106
10cm60cm2
15ml
2X15ml24ug
60ul600pmol30ul
celldish
：中板密度根据不同细胞不同实验有所不同，这里仅提的数据仅供参考
：6孔板细胞质粒转染量12ug足以。
：6cmdish细胞质粒转染量46ug足以。
OptiMEMI减血清培养基是EMEM的改良型其中使用了HEPES和碳酸氢钠进行缓
冲并添加次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L谷氨酰胺、痕量元素和生长因子常用其作为无血清培养基与质粒和lip2000分别混合。
常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶（CAT），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）细胞中本身不表达以及b半乳糖苷酶（bgal）在细胞中有内源表达，需设计空白
对照。当报告基因与目的基因共转时，作为内参，评估目的基因的转染效率，并作为分选标志。r