~5红细胞悬液,取1滴红细胞悬液加入2~3滴广谱抗人球蛋白并进行离心处理,分别置于相同规格试管中在37℃条件下孵育1h,完成孵育后进行反复彻底清洗,滴加抗人球蛋白后进行离心处理,对检测结果进行观察,抗人球蛋白卡选用戴安娜公司生产的DGGelCoombs卡,抗人球蛋白试剂选用IMMUCOR公司生产的A
tiIgG。B组标本采用微柱凝胶技术检测,首先准备微柱凝胶试剂卡,检测前观察试剂卡的外观是否完好,若存在有杂质、干胶、气泡等不可使用,后将试剂卡放置在室温下平衡处理,再采用专用离心机离心处理5mi
;标本准备,采集患者外周静脉血应用EDTA抗凝,取10μl抗凝血红细胞加入1ml生理盐水配制成1浓度的红细胞悬液,将备好的抗人球蛋白检测卡做好标记,待检的细胞加入标记好的微管中,各50μl,加入微柱凝胶孔后在2000rmi
条件下离心5mi
,观察红细胞在凝胶带的聚集位置。13观察指标结果判读标准:微柱凝胶法通过观察红细胞滞留在微柱的上端或分布在凝胶中作为检测阳性标准;为100红细胞沉积于微管底部;为100的红细胞沉积于微管的下段13内;DAT1为80的红细胞沉积在微管下端的23内;DAT2
f为80的红细胞沉积在微管上段23内;DAT3为80的红细胞沉积在微管上段13内,DAT4为凝集的细胞全部位于微管顶部;dp为双群,Hemo为溶血。试管法则以肉眼及光镜下检查红细胞凝聚作为阳性评估标准。14统计学处理本研究相关数据均采用SPSS190软件进行分析,计量资料以(x±s)表示,采用t检验,计数资料以率()表示,采用字2检验,P005),见表1。在DAT结果判读中发现,A组标本有9例检出DAT1,12例检出DAT2,2例检出DAT3,可显示DAT1~3梯度;B组检出11例DAT3,18例DAT4,仅表现为DAT3~4的变化梯度。3讨论试管法抗人球蛋白试验是临床传统的检测新生儿溶血疾病的方法,但在操作过程中需要对红细胞进行反复洗涤,检测方法相对较为繁琐、复杂,在实际临床实验室应用中具有检测效率低下的缺点,并且手工操作、结果判读等影响因素可能导致临床诊断价值的降低。微柱凝胶技术是基于传统血型血清学的一种免疫学新型检测技术,通过结合免疫学技术与凝胶分子筛技术,在离心处理下抗原、抗体反应以及抗体致敏凝集红细胞滞留在微柱上进行结果判读,一般未凝集或未致敏的红细胞分布于微柱的底部,而凝集的红细胞或致敏的红细胞主要位于微柱上段或分布于凝胶中,通过观察红
f细胞滞留的位置反应不同强度的凝集反应具有敏感性高、操作简r