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生物学等的发展,将会有越来越多的人源性抗体用于临床试验之中,从而促进靶向药物治疗的发展。
33核糖体展示技术
核糖体展示是一种完全在体外合成并筛选蛋白质的有力工具。Mattheakis等人在1994年建立了体外核糖体展示随机肽系统,利用“蛋白质核糖体mRNA”三元复合物在体外将基因型和表型联系起来。随后Ha
es和Plukthu
等18在此基础上对该技术加以完善和改良,正式建立了这种体外筛选技术。该技术的基本原理是利用PCR扩增含目的基因的cDNA文库,再加上启动子、核糖体结合位点及茎环结构,在转录翻译偶联系统作用下,形成“蛋白质核糖体mRNA”三元复合物,用相应抗原对反复筛选复合物,分离mRNA,通过RTPCR富集目的基因,并将目的基因导入表达载体,从而获得库容量大、特异性强、亲和力高的人源基因工程抗体库。
核糖体展示技术与噬菌体展示技术和转基因技术相比,由于其完全属于体外操作系统,无需依赖细胞技术和毒性蛋白对宿主生长的影响,不受体内环境的限制,扩大了展示文库的库容量和分子多样性。此外,核糖体展示技术无需进行体内外系
f统转化,全程只需通过PCR技术复制、扩增,使得其建库时间缩短,筛选简便。PCR技术还可引入突变,增加分子多样性,从而获得高亲和力抗体。目前还有多研究表明,核糖体展示技术还能提高小分子抗体的稳定性,如三结构域抗体VH/K可以明显改进ScFv的稳定性19。而核糖体展示技术的最大缺点就是mRNA易降解。目前已有研究表明,氧钒核糖核苷复合物VRC作为过渡阶段的类似物发生作用,可有效地抑制核酸酶,提高mRNA的稳定性。另外“蛋白质核糖体mRNA”三元复合物的稳定性也较差,但可通过在缓冲液中加入一定浓度的镁离子、交联核糖体RNA的磷酸基团,抑制核糖体复合物的解离20。
4重组抗体的临床应用及其最新进展
从鼠源单抗开始,已通过多种技术制备了具有高度亲和性的完全人源化抗体,作为靶向治疗多种疾病的新型药物。其中由杂交瘤技术制备的单克隆抗体不仅结果均一、纯度高、特异性强、血清交叉反应弱,而且制备成本低,而基因工程抗体既保持单抗的均一性、特异性强等优点,又能克服其为鼠源性的不足,因此,拓展mAbs的广泛应用,是研究开发治疗性抗体药物最理想的途径。近三十年来,在基因工程抗体方面的研究成果振兴了整个生物制药行业。目前,全球约有500多种治疗性药物正处于临床前研究,100多种已处于临床试验中。其中,已被FDA批准的有治疗淋巴瘤的Rituximab,治疗乳腺癌的Hercepti
21,以及r
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