山东大学实验报告
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2009年11月
日
同组者张健康于政达郑冲冲系年级08级生科一班组别200800140207题目酵母菌的培养、形态观察、死活鉴定和子囊孢子的观察
一、目的要求1、掌握酵母培养基的配置和酵母菌的接种方法2、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。3、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。4、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。二、基本原理1、培养基：酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培养基来培养；但酵母菌子囊孢子的观察要用麦氏培养基，其有利于子囊孢子的形成。2、酵母菌的形态：酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片和水碘液来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。3、美蓝染色液：美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。4、水碘液染色液：该染液将革兰氏染液用碘液用水稀释4倍后得到的，亦可用于酵母形态和出芽生殖的观察。4、子囊孢子的观察：酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。三、实验器材1菌种：酿酒酵母培养数天的酵母麦氏培养基斜面2溶液与试剂：01吕氏碱性美蓝染液，5孔雀绿，05沙黄、95乙醇，水碘染液3培养基：酵母液体培养基，麦氏培养基。4仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯、接种环等。四、实验步骤1、酵母培养基的配置：蛋白质2，酵母膏1葡萄糖2，加冷水100Ml，自然PH，115℃在下高压蒸汽灭菌30mi
。2、接种和培养：无菌操作下，在灭菌的培养基中倒入少许酵母菌液即可。28℃下培养48h在左右。3、美蓝染色操作：1在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌液，混合均匀；2用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，避免产生气泡；3将制片放置约3mi
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