人褪黑素melato
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ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的本试剂盒用于测定人血清血浆及相关液体样本
中褪黑素melato
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的含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人褪黑素melato
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水平。用纯化的人褪黑素melato
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抗体包被微孔板制成固相抗体往包被单抗的微孔中依次加入褪黑素melato
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再与HRP标记的褪黑素melato
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抗体结合形成抗体抗原酶标抗体复合物经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的褪黑素melato
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呈正相关。用酶标仪在450
m波长下测定吸光度OD值通过标准曲线计算样品中人褪黑素melato
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浓度。
样本处理及要求
1血清室温血液自然凝固1020分钟离心20分钟左右20003000转分。仔细收集上
清保存过程中如出现沉淀应再次离心。
2血浆应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂混合1020分钟后离心
20分钟左右20003000转分。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成应该再次离心。
3尿液用无菌管收集离心20分钟左右20003000转分。仔细收集上清保存过程
中如有沉淀形成应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4细胞培养上清检测分泌性的成份时用无菌管收集。离心20分钟左右20003000转
分。仔细收集上清。检测细胞内的成份时用PBSPH7274稀释细胞悬液细胞浓度达到100万ml左右。通过反复冻融以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右20003000转分。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
f5组织标本切割标本后称取重量。加入一定量的PBSPH74。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持28℃的温度。加入一定量的PBSPH74用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右20003000转分。仔细收集上清。分装后一份待检测其余冷冻备用。
6标本采集后尽早进行提取提取按相关文献进行提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验可将标本放于20℃保存但应避免反复冻融
7不能检测含NaN3的样品因NaN3抑制辣根过氧化物酶的HRP活性。
操作步骤
1标准品的稀释与加样在酶标包被板上设标准品孔10孔在第一、第二孔中分别加标
准品100μl然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl混匀然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl混匀然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉再各取50μl分别加到第五、第六孔中再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul混匀混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、r