体被其结合,荧光素标记的抗原多呈游离的小分子状态,小分子在液相中转动速度较快,测量到的荧光偏振程度也较低。反之,大部分荧光素标记抗原与抗体结合,形成大分子的抗原抗体复合物,检测到的荧光偏振程度也较高。荧光偏振程度与待测抗原浓度呈反比关系,利用这一原理,可以精确地得知样品中待测抗原的相应含量。FPIA还可以对抗体进行检测。
三、荧光偏振与荧光免疫偏振技术的应用
由相关原理可以看出,荧光偏振和FPIA技术很适合研究分子间相互作用,可用于评价pH、温度、盐浓度等对分子结合的影响,同时这项技术低毒、灵敏、快速、样品可重复利用等优势,被广泛应用于环境监测、食品安全监督、疾病诊疗和化学、生命科学的相关分析中。
1、环境监测
FPIA在环境监测中有着重要应用,具有高灵
丁草胺
敏度,高精确度,检验过程简单等优势。例如,
丁草胺,即2氯N26二乙基苯基N丁氧甲基乙酰胺,是水
稻等农作物种植中常用的高效除草剂,丁草胺进入水体会造成污染,
尤其对鱼类呈高毒性,所以对丁草胺的检测十分重要。而传统的各种
3
f荧光偏振与荧光偏振免疫分析法
检测技术都存在灵敏度不佳、耗时、成本高等缺点,相比下FPIA则显示出巨大优势。Ho
gtaoLei等人用荧光标记物32butoxymethyl26diethylphe
ylami
o2oxoethylthioN6336dihydroxy3oxo3Hspiroisobe
zofura
19xa
the
e5y1thioureidohexylpropa
amideTracerC等对丁草胺进行荧光偏振免疫分析,取得了良好结果3。
2、食品安全
在食品安全检验方面,FPIA技术也展示了同样的优势:灵敏、快速。奥比沙星(Orbifloxaci
ORB),即1环丙基568三氟7顺式35二甲基哌嗪14二氢4氧代喹啉3羧酸,是第三代喹诺酮类抗菌药物,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑制作用,一直被作为重要的兽药而广泛使用,在食品中残留的ORB的检测也显得十分必要。Tieju
Mi,XiaoLia
g等人使用荧光标记物LOMBDF对牛奶中的奥比沙星进行FPIA分析,检测限可达39
gml,IC50达245
gml(Z’081)4。另外,粮食及其制品中的真菌霉素也可以使用FPIA进行检验,尤其适合大量粮食样品的快速检验。但FPIA在这方面的进一步应用还需要解决许多问题,比如相比酶联免疫分析(e
zymeli
kimmu
osorbe
tassay,ELISA)等传统技术,其灵敏度仍有待提高,
ORB
4
f化学化工学院仪器分析
需要发展专门的仪器和试剂等,但FPIA技术展现出的前景是十分乐观的5。在其它农药、兽药及一些小分子,如阿特拉津、本菌灵等的检验中FPIA发挥着巨r