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1、核酸的增色效应;核酸变性后增加了A260的光吸收称为增色效应。
变性后DNA溶液的紫外线吸收具有增强的效应,变性DNA的双链解开,碱基中电子的相互作用有利于紫外线吸收,故而产生增色效应。一般以260
m下的紫外线吸收光度作为此效应的指标,DNA变性后260
m处的吸收光度通常有明显增加,但不同来源DNA的变化不一。
核酸的减色效应;双螺旋结构和3’5’磷酸二酯键的形成都会减弱碱基对紫外光的吸收,这种效应称减色效应
DNA复性后,其溶液的A260减小,最多可减小至变性前的A260,这现象称减色效应。
2、核酸的Tm值;通常将DNA的变性达到50时,即增色效应达到一半时的温度称为DNA的解链温度Tm),Tm也称熔解温度或DNA的熔点。DNA的Tm值一般在7085℃之间。
加热可以使DNA变性,DNA热变性是在很狭的温度范围内突发的跃变过程,很像结晶达到熔点时的融化现象,故名熔解温度,用Tm表示。Tm定义中包含了使被测DNA50%的双螺旋结构遭到破坏,即增色效应达到一半的温度作为Tm的含义,不同来源的DNATm值一般为7085℃。
3、DNA双螺旋;DNA分子由两条反向平行的多核苷酸链构成双螺旋结构。两条链围绕同一个“中心轴”形成右手螺旋,在螺旋中形成大沟和小沟
两条反向平行的多聚核苷酸链沿一个假设的中心轴右旋相互盘绕而形成,形成一个大沟和小沟,大沟位于相毗邻的双股之间,而小沟位于双螺旋的互补链之间。磷酸和脱氧核糖单位作为不变的骨架组成位于外侧,作为可变成分的碱基位于内侧,链间碱基按AT,GC配对,碱基对以氢键维系,配对的碱基处于同一个平面上,与螺旋轴垂直。
4、核酸分子杂交;把不同的DNA或RNA链放在同一溶液中作变性处理然后复性不同来源的DNA或RNA单链之间就按碱基配对原则可能形成局部的双链这一过程称为分子杂交。
根据变性和复性的原理,将不同来源的DNA变性,若这些异源DNA之间在某些区域有相同的序列,则退火条件下能形成DNADNA异源双链,或将变性的单链DNA与RNA经复性处理形成DNARNA杂合双链,这种过程称为分子杂交
5、核小体;真核生物染色质的基本结构单位,是DNA绕组蛋白核心盘旋所形成的串珠结构
是染色体形成的基本结构单位,是由组蛋白形成的寡聚蛋白体核心和盘绕在其上的DNA组成
6、退火;热变性DNA在缓慢冷却时,可以复性,这种复性成为退火
7、核酸变性;核酸双螺旋区的H键断裂变成单链没有共价键的断裂。变性的条件物理的、化学的。如热变性、碱变性等,甲醇、乙醇、尿素、甲醛常用做变性剂。
在一定条件下,Dr
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