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NA的紫外线吸收曲线图
PCR技术的原理及过程如图为某一次循环的产物,请据图回答问题。
1PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可分为________、________、________三个步骤。2PCR技术与细胞内DNA复制在解旋时原理不同:细胞内复制利用________使双链间氢键断裂,而PCR技术利用________原理,使双链氢键断裂。以引物为标识,可判断出此产物最早为第________次循环的产物。3PCR反应中,如果以引物为标识,共有几种DNA分子产生?你能把它们画出来吗?【审题导析】
f【精讲精析】1PCR的每一轮循环包括高温变性、低温复性和中温延伸三步,从第二轮循环开始,每次循环的产物也作为模板参与反应。2DNA分子在细胞内复制时。在解旋酶的作用下使氢键断裂,而在体外,DNA在95℃的高温中变性。即双螺旋解开,成为单链;当温度慢慢降低后,两条彼此分离的单链又会重新结合形成双链。在PCR反应中,以引物为标记,第一次循环时,以加入的DNA为模板,两条DNA链可分别由引物Ⅰ和引物Ⅱ与其结合并在DNA聚合酶的作用下延伸,所以形成的每个子DNA中只有一种引物;从第二次循环开始,上次产生的DNA分子又可作为模板参与反应,所以会出现DNA分子两端均含引物的情况,如图所示:
因此题干中所出现的情况是第一次循环的产物。3产生的DNA分子有3种:只含引物Ⅰ的,只含引物Ⅱ的和既含引物Ⅰ也含引物Ⅱ的。【答案】1高温变性低温复性中温延伸2解旋酶热变性一3共有3种,分别为:
当PCR反应体系的温度由变性后快速冷却到50℃左右时,引物与模板结合,一般不考虑解开的两个DNA模板链的重新结合,原因:a模板DNA比引物长得多而且复杂的多,不易重新结合;b引物与模板间的碰撞机会远远多于模板互补链间的碰撞;c加入的引物量足够大而模板链数量少。
PCR技术是把DNA片段在体外酶的作用下,合成许许多多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段,它的基本过程如图所示:
f注:图中短线表示每次扩增过程中需要的引物。每个引物约含20~30个脱氧核苷酸,并分别与两条单链DNA结合,其作用是引导合成DNA子链。1PCR技术的原理是模拟生物体内________的过程。2PCR扩增过程中需要对DNA片段进行高温处理,其目的是________,此过程在生物体内称为______,需________酶的参与。3假如引物都用H标记,从理论上计算,所得DNA分子中含有H标记的占________。4假定DNA片段含200对脱氧核苷酸,经3次扩增,从理论上计算需要____________个游离r
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