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在高温季节,切片更加困难,且切片厚8~15μm,不易连续切片,但其优点是价廉,国内有生产。
冰冻切片后如不染色,必须吹干,贮存低温冰箱内,或进行短暂预固定后贮存冰箱保存。2.石蜡切片其优点是组织结构保存良好,在病理和回顾性研究中有较大的实用价值,能切连续薄片,组织结构清晰,抗原定位准确。用于免疫组化技术的石蜡切片制备与常规制片略有不同:①脱水、透明等过程应在4℃。C下进行,以尽量减少组织抗原的损失。②组织块大小应限于2cm×15cm×02cm,使组织充分脱水、透明、浸蜡。③浸蜡、包埋过程中,石蜡应保持在60℃以下,以溶点低的软蜡最好(即低温石蜡包埋)。组织块脱水、透明、浸蜡时间参考表13:表13组织块处理时间表170乙醇4℃3~4h280乙醇4℃3~4h390乙醇4℃2~3h495乙醇Ⅰ4℃2~3h595乙醇Ⅱ4℃1~2h
f6100乙醇Ⅰ4℃15h7100乙醇Ⅱ4℃15h8二甲苯Ⅰ4℃05~1h9二甲苯Ⅱ4℃051~1h10石蜡Ⅰ60℃1h11石蜡Ⅱ60℃2h
以上全过程为1824h,也可在室温内使用自动脱水机代替。如组织块小,直径小于05cm,可用快速石蜡包埋切片,全过程只需4h左右。
石蜡切片为常规制片技术,切片机多为轮转式,切片厚度2~7μm,应用范围广,不影响抗体的穿透性,染色均匀一致。由于甲醛固定、有机熔剂和包埋剂对组抗原有一定的损害及遮蔽,使抗原特征发生改变。有人报告经蛋白酶消化,可以改善光镜免疫组化染色强度,常用的有胰蛋白酶、链霉蛋白酶及胃蛋白酶等消化法。石蜡切片应入37℃恒温箱过夜,这样烤片可减少染色中脱片现象。切片如需长期贮存,可存放于4℃冰箱内备用。
石蜡切片优点较多,但在制片过程中要经过酒精、二甲苯等有机溶剂处理,组织内抗原活性失去较多,有人采用冷冻干燥包埋法(Freezedryi
gembeddi
gmethed),可以保存组织内可溶性物质,防止蛋白变性和酶的失活,从而减少了抗原的丢失。该法是将新鲜组织低温速冻,利用冷冻干燥机(Freezi
gdryer)在真空、低温条件下排除组织内水分,然后用甲醛蒸气固定干燥的组织,最后将组织浸蜡、包埋、切片。此法可用于免疫荧光标记、免疫酶标记及放射自显影。
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