翔宇教育集团宝应中学复习教学案
选修1专题1基因工程
主备人：杨学志
选修3现代生物科技专题
专题1基因工程知识点背诵
1．1DNA重组技术的基本工具一、概念：基因工程又叫做DNA重组技术，就是按照人类的要求，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后导入另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。二、基因操作的工具：基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工，即对DNA分子进行剪切和拼接，其主要工具有：1．分子手术刀：限制性内切酶，简称限制酶。这种酶主要存在于原核生物中，由于每种限制酶能识别特定的核苷酸序列，因此，限制酶能在特定的切点上切割DNA分子。特点：A、专一性：每一种限制酶只能识别双链DNA分子一种特定的核苷酸序列。B、切点：各种酶切点不同，即具有特定的酶切位点。作用：在特定的切点上切割DNA分子形成两个完全相同的黏性末端。种类：有4000多种限制酶，切割成的DNA末端可分为两大类：黏性末端和平末端中轴线切口为AT，CG2．分子缝合针：其实质是一种DNA连接酶。作用：是把两个黏性末端之间的缝隙“缝合”起来。（实质是“缝合”磷酸二酯键）酶的分类：A、Ｅ．coliDNA连接酶从大肠杆菌中分离得到，只能对互补链的黏性末端起作用B、T4DNA连接酶（对两种末端都起作用）DNA连接酶与DNA聚合酶的异同：（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键，在DNA复制中起作用；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键，在基因工程中起作用。（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，因此DNA连接酶不需要模板。二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。3．目的基因的运输工具：运载体或分子运输车，借助运载体将外源目的基因送入受体细胞。常用的运载体是质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。作为运载体要符合以下条件：a对受体细胞的生存没有决定性影响；b能停留在受体细胞内复制，并稳定保存；c具有多个限制酶切点，便于目的基因的连接；d具有某些标记基因，便于筛选、检测。三、重组DNA模拟操作注意：剪刀是模拟EcoRI，用不干胶时，意识到它是模拟DNA连接酶，只能黏连磷酸二酯键处，而不能去黏连碱基对处。1．2基因工程的基本操作程序一、目的基因的获r