外周血单个核细胞(PBMCs):包括淋巴细胞和单核细胞,其比重在10751090,而红细胞和多核白细胞比重在1092左右。分离淋巴细胞以密度1077±0001的分层液为佳。Ficoll分离液法主要用于分离PBMCs,是一种单次差速密度梯度离心法。聚蔗糖泛影葡胺是一种较理想的细胞分层液,商品名Ficoll。分离时先将分层液置试管底层,然后将肝素抗凝全血以Ha
ks液或PBS液做适当稀释后,轻轻叠加在分层液的上面,使两者形成一个清晰的界面。水平式离心后,离心管中会出现几个不同层次的液体和细胞带:
由于红细胞和粒细胞比重大于分层液,同时因红细胞在Ficoll液中凝聚成串而沉于管底,血小板则因密度小而悬浮于血浆中,只有与分层液密度相当的单个核细胞密集在血浆层和分层液的界面之中,呈白膜状为白膜层。吸取该层细胞,经洗涤离心重悬即为单个核细胞。本法分离单个核细胞纯度可达95,淋巴细胞约占9095,细胞收率可达80以上,但室温超过25℃时可影响细胞收率。辅助性T细胞的典型表面标志:CD3CD4CD8。(Th1主要分泌IL2,IFNγ或TNFβ等辅助细胞免疫或参与迟发型超敏反应;Th2主要分泌IL45610等辅助体液免疫、参与速发型超敏反应)细胞毒性T细胞的典型表面标志是CD3CD4CD8。CD3CD8CD30可认定为Tc1细胞;(CD3CD8CD30可认定为Tc2)调节性T细胞:自然存在的,其典型标志为CD4CD25Foxp3(最重要的分子标记是一种转录因子Foxp3)成熟B细胞均表达CD19,B1细胞CD19CD5,B2细胞CD19CD5NK细胞的典型标志:CD3CD16CD56。单核巨噬细胞的典型表面标志为CD14。人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83,但不表达MPS、TBNK细胞的典型表面标志(CD14319和CD201656)。T细胞增殖试验有:形态学检查法,3HTdR掺入法、MTT比色法溶血空斑实验(PFC):将经SRBC免疫过的小鼠脾细胞与一定量的SRBC混合,在补体参与下,使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解,形成肉眼可见的溶血
f空斑,每一个空斑中央含一个抗体形成细胞,空斑数目即为抗体形成细胞数目。细胞因子(CK):是由机体活化的免疫细胞及某些基质细胞分泌的小分子蛋白质,通过结合细胞表面的相应受体发挥生物学效应(有旁分泌、自分泌、内分泌)。细胞粘附分子(CAM):是由细胞产生、介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的分子。酶联免疫斑点实验(ELISPOT):在包被有待测CK抗体的微孔板上,加入可分泌相应细胞因子的待测细胞,在有或无刺激物存在的条件下培养后,待测细胞向r