第十七章流式细胞仪分析技术及应用第一节概述
流式细胞仪由液流系统、光学与信号转换测试系统和信号处理及放大的计算机系统三大基本结构组成，可对细胞悬液中的单个细胞或特定细胞或其超微结构进行多参数快速分析，带分选系统的流式细胞仪还可按实验设计要求分选出具相同特征的同类型细胞，用于培养或进一步研究。一、工作原理流式细胞仪的工作原理是采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析的精确性。（一）基本组成结构1液流系统由样本和鞘液组成。待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经荧光染料标记的单克隆抗体染色后置入样品管中，在清洁气体压力下进入流动室形成样本流。鞘液是辅助样本流被正常检测的基质液，其主要的作用是包裹在样本流的周围，使其保持处于喷嘴中心位置以保证检测的精确性，同时又防止样本流中细胞靠近喷孔壁而堵塞喷孔。2光学系统（1）激光光源（2）分光镜（3）光束成形器（4）透镜组（5）滤片（6）光电倍增管（PMT）3数据处理系统主要由计算机及其软件组成，进行实验数据的分析、存储、显示，是流式细胞仪组成部件中的重要环节。（二）基本工作原理检测需要标记了特异性荧光染料的单细胞悬液和鞘液，光电倍增管将已接收的光电信号转换成电压脉冲和积分脉冲，使信号放大，该信号进入计算机系统进行数据转换、储存、分析、处理按不同的检测设计采用相应软件程序对结果进行综合分析，并以图像和数据显示于荧光屏上，包括了单参数和二维或三维图像资料，阳性细胞百分率、斜率、峰值、峰面积等多参数资料。二、散射光的测定（一）前向散射光（二）侧向散射光三、荧光测量（一）荧光信号测量与放大器（二）荧光补偿
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f四、细胞分选原理（一）分选的基本原理当实验设计中设定了被分选细胞的特性参数时，此类细胞在形成液滴时会被充电，使其带有正电荷或负电荷，未被设定分选参数的细胞及空白液滴不带电荷。带电荷的液滴在落入电极偏转板的高压静电场时，依所带电荷是正或是负而发生向右或向左偏转，落入指定的收集器中，完成细胞分选的目的。（二）分选的技术要求1分选速度一般要求分选速度至少达5000个／秒左右。2分选纯度3分选收获率4分选得率第二节数据的显示与分析
流式细胞仪收集细胞产生的各r