3，5二硝基水杨酸比色定糖法
一实验内容利用3，5二硝基水杨酸试剂测定饮料中的还原糖和总糖含量。
二实验目的1领会微量糖分的测定方法。2熟悉分光光度仪操作原理和掌握操作技术。
三实验原理3，5二硝基水杨酸试剂与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合
物，在一定范围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，于520
m比色测定。四仪器与试剂1仪器⑴25mL比色管；⑵恒温水浴；⑶72型分光光度计；⑷各规格移液管。2试剂⑴3，5二硝基水杨酸试剂：甲液：溶解69g结晶酚于152毫升10氢氧化钠溶液中，并用水稀释至69毫升，在此溶液中加69g亚硫酸氢钠。乙液：称取255g酒石酸钾钠加到300毫升10％氢氧化钠溶液中，再加入880毫升13，5二硝基水杨酸溶液。
f将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。在室温放置7～10天以后使用。⑵6molL盐酸；⑶20氢氧化钠溶液；⑷10gL葡萄糖标准液。葡萄糖标准液的配制：准确称取01g分析纯的无水葡萄糖预先在105℃干燥至恒重，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100mL容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。浓度为1mgmL。五操作方法1葡萄糖栋准曲线的制定取7支25mL的试管，分别加入00、02、04、06、08、10、12mL浓度为1mgmL的葡萄糖标准液，再分别加入20、18、16、14、12、10、08mL蒸馏水（注意：各管为2mL溶液），然后依次加入3，5二硝基水杨酸试剂15mL。将各管溶液混合均匀，在沸水浴中加热5分钟，取出后立即用冷水冷却至室温，再加蒸馏水定容到25毫升，摇匀。于520
m；波长处测OD值。以葡萄糖毫克数为横坐标光密度值为纵坐标，绘制标准曲线2样品蔗糖含量测定量取适量（1020mL）饮料样品，转移到100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。⑴样品中还原糖的测定：准确量取1mL样品稀释液移入比色管中，其余操作均与制作标准曲线时相同。
f⑵样品中总糖的测定：准确量取50mL样品稀释液，放在锥形瓶中，加入5mL6molL盐酸，在6870℃水浴中加热30分，冷却后加入1滴酚酞指示剂，以20氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，定容到100毫升。
准确量取1m还L样品原水解糖液移g入比色1管0中0，m其L余操作均c与制m作V标准曲1线0时0相同。
六结果计算用下式算出饮料中还原糖与总糖的百分含量：
式中：c由标准曲线查得还原糖浓度，mgmL；V饮料稀释体积，mL；m饮料质量，g。
式中c由标准曲线查得还原糖浓度，mgmLV饮料稀释液体积，mL；F饮料水解液r