取组织：1心脏灌注将小鼠在肋弓下缘剪开，夹住胸骨角，向上翻开，暴露胸腹膜，从右向左剪开胸腹膜，暴露心脏，剪开右心耳（在心尖靠右一点）插入针管，先打入10ml水，再注入10甲醛约10ml，（可重复一次），至肝脏发白，四肢有抽搐为成功。2取脑取脑后放入4多聚甲醛中，固定保存24h3梯度脱水不是必须步骤，但做的效果可能更好，但标本脱片是否与之有关系？将脑放入5蔗糖48h25蔗糖48h1蔗糖48h后放入4多聚甲醛中，固定保存，制成切片。4自制蜡块免疫组化1常规石蜡切片，石蜡脱水60℃烤片30mi
脱蜡：二甲苯Ⅰ5mi
二甲苯Ⅱ10mi
无水乙醇95酒精Ⅰ95酒精Ⅱ80酒精各5sPBS液洗3次，每次5mi
抗原修复①枸橼酸盐微波修复（冷却与小火之间）13mi
室温冷却至常温②枸橼酸盐微波修复（冷却与小火之间）2x10mi
（10mi
后加少许冷枸橼酸）室温冷却至常温（此步作为①未作出时的办法，最大可以尝试到3x10mi
）③枸橼酸盐微波修复（高火）4x6mi
室温冷却至常温（此步作为①②均未作出时的办法）3H2O210mi
（买30的回来自己稀释）PBS液洗3次，每次3mi
封闭用正常山羊血清工作液室温孵育20mi
一抗4℃过夜，第二天将过夜片放入37℃温箱孵育1hPBS液洗3次，每次3mi

2
345
6滴加生物素标记二抗37℃孵育30mi
PBS冲洗3X5mi
7辣根酶标记链霉卵白素工作液37℃温箱孵育30mi
PBS液洗3次，每次3mi
8DAB显色（此步最重要，一定要摸出最佳显色时间，要浪费三张片子，一张显过了，一张未显出来，一张介于二者之间）9自来水终止显色10苏木素染色2mi
，自来水冲洗（8次以上，不能怕麻烦），盐酸酒精分化，自来水冲洗（6次以上），PBS返蓝20mi
（PBS要预热15mi
）11脱水，透明（80酒精95酒精Ⅱ95酒精Ⅰ无水乙醇二甲苯Ⅱ二甲苯Ⅰ各5秒，就是将脱蜡反过来了）12树胶封片（就滴很少，用手按压可以顺便将气泡压出，滴多了，树胶容易翻上盖玻片，那就麻烦了）
f注：95酒精Ⅱ95酒精Ⅰ二甲苯Ⅱ二甲苯Ⅰ都有卖的PBS自己配很划算（下页是配制方法）
A液：01molL磷酸二氢钾：磷酸二氢钾（KH2PO4，MW13609）1361g，加双蒸水至100ml。B液：01molL磷酸氢二钠：酸酸氢二钠（Na2HPO42H2O，MW17799）178g，加双蒸水至100ml。或者酸酸氢二钠（Na2HPO412H2O，MW35814）358g，加双蒸水至100ml。pH－－A液（ml）－－B液（ml）560－－950－－025591－－900－－100624－－800－－200647－－700－－300664－－600－－400681－－500r