不同形式的学习记忆形成有关4。成年海马新生神经元整合,并将连续不断的信息连接起来,促进学习和记忆信号的形成,进而整合进入新的记忆环路,形成新的信息系统5。前期研究表明,百事乐胶囊具有良好的抗抑郁功效,可通过多种有效成分的合理、有机的组合,多途径地作用于机体,抑制海马神经元凋亡,促进神经元的突触可塑性67。因此,本实验以“海马神经再生”为切入点,并进一步定位于“一区一回”,研究抑郁症海马神经再生的分子机制及百事乐胶囊的干预作用。
1实验材料
11动物
健康雄性SD大鼠65只,SPF级,8周龄,体质量240~280g,湖南斯莱科景达动物中心提供,动物许可证号SCXK(湘)20090004。在光暗周期为12h12h的条件下饲养于笼中,自由获得饲料和饮水。
12药物
百事乐胶囊,湖南省中医药研究院提供,批号20110421;盐酸氟西汀胶囊,礼来(苏州)制药有限公司,批号0722A。
13主要试剂与仪器
皮质酮ELISA试剂盒(RD公司);蛋白激酶A(PKA)一抗(武汉博士德生物有限公司);脑源性神经营养因子(BDNF)一抗、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)一抗(Ambo试剂公司);封闭用正常羊血清(北京中山生物技术有限公司);羊抗兔IgG二抗(美国Vector公司);DAB显色液(北京中衫金桥生物有限公司);无水乙醇(上海化学试剂公司);二甲苯(长沙延风化学试剂厂);多聚赖氨酸(AR0003);即用型SABC液;正常山羊血清封闭液(06H22C09)。MK3型酶标仪(美国Thermo公司);TS12A生物组织自动脱水机(湖北孝感市宏业医用仪器有限公司);三用电热恒温箱(余姚市东方电工仪器厂);BMⅧ生物组织包埋机(孝感市宏业医用仪器有限公司);生物组织切片机(ThermoScie
tific);DH250型电热恒温培养箱(北京市科伟永兴仪器有限公司);CSⅥ摊片烤片机(孝感市宏业医用仪器有限公司);Morris水迷宫、开野视频跟踪系统(Pa
lab);显微镜(Zelss)。
2实验方法
21分组与给药
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所有大鼠适应环境3d,期间进行1蔗糖水训练,测定6:00pm9:00am大鼠1蔗糖水摄入量。选取糖水摄入量相近的60只大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组及百事乐高、中、低剂量组,每组10只。氟西汀组予盐酸氟西汀胶囊54mgkg灌胃,百事乐高、中、低剂量组予百事乐胶囊288、144、072gkg灌胃,每日1次(8:309:00),均按10mLkg体质量给药,空白组和模型组给予等量蒸馏水,连续21d。
22造模
参照文献89方法,采用慢性轻度不可预见性的应激模型加孤养,空白组每r