天津生物芯片技术有限责任公司大肠杆菌O104核酸扩增（PCR荧光探针法）检测试剂盒说明书核酸扩增（PCR荧光探针法）
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大肠杆菌O104核酸扩增（PCR荧光探针法）检测试剂盒
【产品名称】产品名称】中文名称：大肠杆菌O104核酸扩增（PCR荧光探针法）检测试剂盒英文名称：RealTimePCRdiag
ostickitforEscherichiacoliO104【包装规格】包装规格】20次盒预期用途】【预期用途】用于临床样品以及环境样品中的大肠杆菌O104的检测。检测原理】【检测原理】试剂盒采用taqma
荧光探针的技术，在反应过程中大肠杆菌O104特异的荧光探针跟靶核酸杂交同时被Taq酶水解把探针上的荧光基团和淬灭基团分开从而通过荧光增量来实时判断大肠杆菌O104的存在。产品组成】【产品组成】组份规格1ml支160l支12l支100l支100l支1ml支数量3支1支1支1支1支1支核酸提取液大肠杆菌O104荧光PCR反应液Taq酶大肠杆菌O104阳性对照品阴性对照品DEPCH2O
大肠杆菌O104核酸扩增（PCR荧光探针法）检测试剂盒
扩增仪】【适用的RealTimePCR扩增仪】ABI、Roche、MJ、Biorad、Eppe
dorf等多种全自动荧光定量PCR检测仪实验操作】【实验操作】1．基因组提取（1）取培养后的菌液约15ml，12000rpm离心2mi
，弃上清。（2）加入200l无菌水，充分混匀，12000rpm离心2mi
，弃上清。（3）加入80l裂解液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100℃水浴15分钟，冰上放置10分钟后12000rpm离心3mi
。（4）取上清液用于PCR检测。2．荧光定量PCR检测（1）按下列组份配制反应液（反应液配制请在冰上进行）大肠杆菌O104荧光PCR反应液：74lTaq酶：03l样品DNA或阴阳性对照品：5lDEPCH2O：123l（2）PCR扩增95℃2mi
95℃15sec40Cycles60℃1mi
荧光检测在60℃，反应体系为25l，荧光通道选用FAM通道。结果判读】【结果判读】1．基线的设定（1）对于ABI系列仪器，分析前把参比荧光定为
o
e，如果没有Ct16的强阳性标本，就第1页网址：httpwwwtjbiochipcomi
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选315个循环的平均荧光信号为基线分析；如果有Ct16的强阳性标本，就将此标本定为AFUMIDNA1010copyml，并将此样品从数据库中剔除，再以315个循环的平均荧光信号为基线再分析Ct。（2）对于iCycler仪器，基线一般按照自设值（210）即可，在实验结束后，选择PCRr