毕业设计（论文）开题报告
小鼠解剖、DNA采集与提取、引物设计、基因片段PCR，琼脂糖凝胶电泳
拟解决的主要问题：
作为导师研究课题的一部分，完成基因型鉴定后为后续实验奠定基础。
三、研究方法及措施（拟采取的研究手段及技术路线、实验方案等）
1、小鼠解剖：（1）准备实验工具（PBS缓冲液、培养皿、解剖工具等）；（2）捏住母鼠尾巴中部将母鼠提起，置于鼠笼上，用颈椎脱臼法处死；（3）用75酒精喷壶喷湿母鼠腹部皮毛，在培养皿中倒入PBS缓冲液；（4）用镊子提起母鼠腹部皮肤，用剪刀横向剪一个创口，撕开；（5）用剪刀剪开腹腔膜，用镊子取出子宫，移至培养皿中；
第3页（共10页）
f杭州师范大学本科生毕业设计（论文）开题报告
（6）在体视显微镜下操作，用镊子撕开子宫及羊膜，分离胚胎；
（7）将胚胎移至干净PBS缓冲液中，剪尾做DNA提取；
2、DNA采集与提取：
DNA采集
（1）剪取小鼠尾巴约03里面置EP管备用；
（2）解剖小鼠取视网膜、内耳、血液、心肌、皮肤等组织部分置EP管备用。
DNA提取
方法一：碱裂解法
（1）剪取03厘米小鼠尾于15mlEP管
（2）加入100ul50MNaOH
（10mlstockof50mMNaOH995mlddH2050ul10NNaOH）
（3）95℃加热10分钟，涡旋
（4）加入10ul1MTris（PH80），涡旋
（5）12000g离心5分钟
（6）加入100ulTE（PH80）
方法二：蛋白酶消化
第4页（共10页）
f杭州师范大学本科生毕业设计（论文）开题报告
（1）剪取03厘米小鼠尾于15mlEP管（2）加入400ulTaildigestio
buffer及25ul10mgmlprotei
aseK（3）60℃加热，过夜（4）加入200μl酚氯仿异丙醇溶液，涡旋至乳白色，14000g离心5分钟（5）吸取300ul上清液至新EP管，加入900ul100乙醇，摇动46次，
14000g离心1分钟（6）倒去上清液，加入350ul75乙醇，14000g离心1分钟（7）倒去上清液，自然风干（8）加入50ulTE（PH80）
蛋白酶k是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，是枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（tritirachiumalbumlimber）中纯化得到，用于生物样品中蛋白质的一般降解。
3、引物设计：本次实验所用引物由美国罗切斯特大学甘霖教授完成。4、基因片段PCR：（1）高温变性（95℃）
第5页（共10页）
f（2）低温退火（60℃）
杭州师范大学本科生毕业设计（论文）开题报告
（3）室温延伸（72℃）
5、琼脂糖凝胶电泳：
（1）配制1XTAE缓冲液（附录）
（2）制作琼脂糖凝胶：根据引物大小配制（600bp以下2，600bp以上15）
例：制作2凝胶100ml
电子天平称取琼脂糖2g于锥形瓶中，加r