实验六纸层析法观察转氨基作用
【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用09救援一班第三大组李岚宇2009222336
室温：28°（一）实验目的：
1、学习氨基酸纸层析的基本原理。2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а酮酸与α酮基的互换反应称为转氨基作用。转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：
ALT
α酮戊二酸丙氨酸
谷氨酸丙酮酸
本实验以丙氨酸和α酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，
以证明转氨基作用。纸层析属于分配层析。以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被
吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸
的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断
分配。由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组
分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不
同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：
物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。（三）实验材料与仪器：
试剂：1、001molLpH74磷酸盐缓冲液。2、02molLNa2HPO4溶液81ml与02molLNaH2PO4溶液19ml混匀用蒸馏水稀释
20倍。3、01molL丙氨酸溶液称取丙氨酸0891克先溶于少量001molLpH74磷酸盐缓
冲液中以10NNaOH仔细调至pH74后加磷酸盐缓冲液至100ml。4、01molLα－酮戊二酸称取α－酮戊二酸1461克先溶于少量001molLpH74
磷酸盐缓冲液中，以10NNaOH仔细调至pH74后，加磷酸盐缓冲液至100ml。5、01molL谷氨酸溶液称取谷氨酸0735克先溶于少量001molLpH74磷酸盐缓
冲液中，以10NNaOH仔细调至pH74后加磷酸盐缓冲液至50ml。6、05茚三酮溶液称取茚三酮05克于100ml丙酮中溶解。7、层析溶剂：将重蒸过的酚2份和水1份按比例混合后，放入分液漏斗中，震荡，
静置24小时后分层，将下部酚层转移到瓶中备用。仪器：玻璃匀浆器、10ml试管、培养皿、表面皿、沸水浴锅、37℃恒温水浴箱、9cm圆
滤纸、烘箱、手术剪刀、r