MTT的操作方法
一、MTT是什么MTT是一种粉末状化学试剂，全称为345dimethylthiahiazozy135diphe
ytetrazoliumromide，汉语化学名为34，5二甲基噻唑22，5二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。二、MTT法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT主要有两个用途1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；2．细胞增殖及细胞活性测定。三、为何MTT可以用来做上述工作检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formaza
）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490
m波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。四、实验所需材料1．MTT溶液的配制通常MTT配成的终浓度为5mgml须用PBS或生理盐水做溶剂。市面上一般MTT的包装为100mg250mg或1g11对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。具休做法：预
f先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20mlPBS，从中先吸取5001000ulPBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT完全混匀后，用022μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光避光袋或是黑纸、锡箔纸包住可长期保存于20度。按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。12对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。
注意事项：
l在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。l配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感lMTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内（个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错）有效，或配制成5mgml保存在20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。lMTT有致癌性，用的时候小心有条件最好带那种透明的簿膜手套2．MTT甲瓒溶解液21二甲基亚砜DMSO，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大r