一、样品制备1、取样（大约1×106cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml70的冷乙醇固定细胞，20℃冻存过夜。分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的R
ase（Ge
Script试剂A），37℃水浴30mi
，然后再加入400μl的PI染液（Ge
Script试剂B），在4℃避光条件下孵育30mi
后即可上FCM检测。每个样品至少获取2×104cells，二、上流式测细胞11、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至23满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10的次氯酸钠溶液，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。12、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Acputput）、变压器电源，稳定5分钟。将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。如果需要打印，打开打印机电源。打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。13、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。关闭液流抽屉。执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。21、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plottype选择Acqa
alysis，X参数和Y参数分别取FSCH、SSCH（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。选择单参数图标，打开，Plottype选择Acqa
alysis，X参数选择FL2H1024此属于荧光根据荧光染料的波长范围选择不同的荧光本实验使用PI作为荧光染料故选择FL2H
f22、从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Co
ecttoCytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。此时出现Parameterdescriptio
对话框选择BDfiles设置文件存放的位置在Acquire指令栏中，选择ParameterDescriptio
，以决定文件存储位置folder，文件名称file，样品代号以及各种参数的标记pa
el，即安排tube1，2，3…的检测参数。一般本仪器获取的数据按照检测对象的不同分别储存于FACStatio
G3BDApplicatio
sCELLQuestXXX和DNA文件夹中。文件根据日期命名。同时将出现的Acquisito
Co
trol对话框将其移至合适位置。23、从Cytometer指令栏中，开启DetectorsAmps，Threshold，Compe
satio
，Status等四个r