因此细胞培养时,为保证细胞能顺利生长和繁殖,一般需添加血清、血浆等天然成分。
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f探讨4:动物细胞培养需要控制的气体环境是怎么样的?各自起什么作用?提示:95的空气和5的CO2混合气体;O2维持细胞代谢,CO2维持培养液的pH。思维升华1.动物细胞培养的操作流程
2.过程解读1动物细胞培养需要满足的条件①充足的营养供给微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。②适宜的温度:哺乳动物多以365±05℃为宜。③适宜的pH:多数细胞生存的适宜pH为72~74。
O2:有氧呼吸、细胞代谢④气体环境CO2:维持培养液的pH
培养液和培养用具杀菌消毒培养过程加抗生素杀菌毒的环境定期更换培养液,以便清除代谢产物
⑤无菌、无2原理:细胞增殖。3要把动物细胞分散成单个细胞培养的原因分散成单个细胞后容易培养,细胞所需的营养容易供应,其代谢废物容易排出。而用大块组织培养时,内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难,因此,这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。同时,分散成单个细胞培养,可使得在细胞水平操作的其他技术得以实现。4选取幼龄动物的组织、器官作为材料的原因动物细胞培养时,一般选取幼龄动物的组织、器官,其细胞的分化程度较低,增殖能力强,有丝分裂旺盛,容易培养。5原代培养和传代培养的辨析原代培养可有两种表述:a细胞悬液第一次在瓶中培养,没有分瓶培养之前的细胞培养;b第1代细胞的培养与传10代以内的细胞培养统称为原代培养。两种表述没有本质区别。传代培养同样有两种表述:a细胞悬液培养一段时间后,分瓶再进行的细胞培养;b传10代以后的细胞培养,统称为传代培养。
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f6细胞贴壁贴壁生长和接触抑制①细胞贴壁:培养液中分散的动物细胞,置于适宜的条件下,能够分裂,这些细胞贴附在培养瓶壁上,称为细胞贴壁,或贴壁生长。②接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖的现象。7胰蛋白酶在培养过程中的作用及与原代培养和传代培养的联系原代培养和传代培养一般均需对细胞进行胰蛋白酶细胞分散处理,区分两种“培养”的关键是看用胰蛋白酶处理的对象。①第一次:用胰蛋白酶对剪碎的动物组织进行处理,使其分散成单个细胞后进行培养,即为原代培养。②第二次:细胞培养过程中出现接触抑制,用胰蛋白酶使其从瓶壁上脱离下来,然后,将其分散到多个培养瓶中继续培养,即为传代培养。
1.一般来说,动物细r