，把甲硫氨基酸基因引入其中，以色氨酸合成酶基因作为启动子，制备A链和B链的质粒。将它们分别引入大肠杆菌K一12株并使之增殖，然后将游离的A链、B链进行初步纯化，再将两者混合，在二硫代苏糖醇存在下形成二硫链，合成了“生物合成的人胰岛素BHI”，又来自重组体DNA的人胰岛素，简称HIrDNA。人胰岛素中在A6一A儿间、A7一B7间和A2OB19间存在3个二硫键，但采用上述制法，可能在上述部位之外产生二硫键而形成异构体。这些异构体可用高效液相色谱法与原来的人胰岛素分离，这样便增加了精Nr序，使生产效率有所下降。二、通过合成人胰岛素原的制法
f精心整理此法是先生成人胰岛素的前体即人胰岛素原，再用酶切除C肽而制备人胰岛素。先合成人胰岛素原的DNA，用与上述相同的方法引入大肠杆菌K一12株，生成与色氨酸合成酶相连的人胰岛索原。以溴化氰切断、纯化后，可在p一巯基乙醇存在下使胰岛素原分子折叠，在正确的位置形成二硫键。这样一次反应的效率为7O％，由于反应副产物可再循环进行反应，生产效率较高。此法也可能生成具有不同二硫键的异构体，但由A链一C肽一B链形成一系列肽链的可能性比预先分别合成A链、B链要低。精制后要用胰蛋白酶切断C肽、用羧肽酶B除去B链C端残留的精氯酸，即生成胰岛素。后法与前法相比，不仅工序缩短，胰岛素制剂本身的纯度也提高。另一方面，人胰岛素原降血糖的能力虽仅为人胰岛素的l／7，但其生物学半减期约为后者的5倍，且对肝脏释出葡萄糖的抑制作用较强。因此美国将人胰岛素速效制剂与人胰岛素原并用，与人胰岛素中效制剂作了双盲对照的临床试验，结果表明，使用人胰岛素原的患者心肌梗塞发病例数较多，使用胰岛素原本身治疗糖尿病的计划即告中止。最近又研究了以酵母菌合成在A链和B链之间只包括对A链、B链以后的折叠十分必要的3个氨基酸的肽。这种情况也是在弓1入二硫键后切除不需要的3个氨基酸基。二、HIrDNA的性质HIrDNA与来自人胰岛素具有相同的物理化学性质，并证明与高纯度猪胰岛素具有生物等效性。为了搞清上述两法合成的产品中是否混有来自大肠杆菌的异物，特别是大肠杆菌多肽ECP，曾将不含特定遗传信息的DNA片段编入大肠杆菌质粒，在生产HIrDNA时进行同样处理，然后对已被所得到的成分致敏的豚鼠给予HIrDNA，结果并未出现局部过敏坏死反应、过敏反应或皮肤反应。反过来，大鼠连续给予HIrDNA后，皮内给予ECP，也不引起局部过敏坏死反应。总之，认为其并未混入r