氨基酸的纸层析法
一、实验目的学习氨基酸纸层析法的基本原理。掌握氨基酸纸层析的操作技术。二、实验原理纸层析法（paperchromatography）是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，利用样品在两种互不相容的溶剂中分配系数的不同达到分离的目的。纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成。展层时，水为静止相，他与滤纸纤维亲和力强；有机溶剂为流动相，它与滤纸纤维亲和力弱。将样品在滤纸上确定的原点处展层，由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配，且他们的分离系数各不相同，所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同，于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来，形成距原点不等的层析点。分配系数（K）溶质在流动相中的浓度CL溶质在固定相中的浓度CS比移值（Rf）从原点至层析点中心的距离原点至溶剂前沿的距离三、实验仪器与试剂1、实验仪器试剂瓶、天平、通风橱、容量瓶、量筒、层析滤纸、直尺与铅笔、毛细管、层析缸、电热吹风机、烘箱、培养皿（喷雾器）2、实验试剂：10异丙醇：量取50ml异丙醇，于500ml的容量瓶中定容。001molL的氨基酸标准溶液：赖氨酸标准溶液：称取赖氨酸标准品0146g混合溶于100ml10异丙醇中。谷氨酸标准溶液：称取谷氨酸标准品0147g混合溶于100ml10异丙醇中。脯氨酸标准溶液：称取脯氨酸标准品0115g混合溶于100ml10异丙醇中。
f苯丙氨酸标准溶液：称取苯丙氨酸标准品0165g混合溶于100ml10异丙醇中。混合氨基酸标准溶液：量取赖氨酸标准溶液，谷氨酸标准溶液，脯氨酸标准溶液，苯丙氨酸标准溶液各20ml，混匀。层析溶剂：正丁醇：乙酸：蒸馏水415350ml缸，现用现配025茚三酮显色液：称取025g茚三酮，溶于100ml丙酮中。四、试验步骤1、滤纸的准备取15×15cm的层析滤纸条一张，在底端2cm处用铅笔与直尺画一横线，在此线上每隔25cm做一标记，记作五种氨基酸的点样位置。2、点样取毛细管在每个点样处精确点样，其直径约23
m为宜，23次为佳。点（大约为毛细管管长的1413）必须在每一滴样品干后再滴第二滴，在操作过程中应戴上乳胶手套，以避免污染滤纸。3、层析向层析缸缸底的培养皿中倒入层析溶剂，液层约厚15cm。将点好样的滤纸放入层析缸中，注意点样端朝下，盖好盖子，并用回形针将其固定。当溶剂上升至离滤纸顶端约2cm时（大约1h），立即取出并用铅笔与直尺画一条直线标出溶剂前沿的位置，再用吹风机将其吹干。4、显色将层析滤纸放在盛有025的茚三酮显色液的培养皿中浸润（或用r