实验六细菌的荚膜染色
1实验目的
掌握细菌的荚膜染色法熟炼显微镜使用
2实验原理
由于荚膜与染料间的亲和力弱,不易着色,通常采用负染色法染荚膜,由于荚膜与染料间的亲和力弱,不易着色,通常采用负染色法染荚膜,即设法使菌体和背景着色而荚膜不着色,从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。以上,膜不着色,从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈。由于荚膜的含水量在90以上,故染色时一般不加热以上固定,以免荚膜皱缩变形。固定,以免荚膜皱缩变形。
3实验器材
涂片染色用的细菌培养物荚膜染色(钾细菌)的斜面培养物。荚膜染色(钾细菌)24h的斜面培养物。
用滤纸过滤后的墨汁、复红染色液。用滤纸过滤后的墨汁、复红染色液。显微镜、松柏油擦镜纸、吸水纸等。显微镜、松柏油、擦镜纸、吸水纸等。
4实验步骤
(1)制片:取洁净的载玻片一块,加蒸馏水一滴,取少量菌体放入水滴中混匀并涂布。(2)干燥:将涂片放在空气中晾干或用电吹风冷风吹干。(3)染色:在涂面上加复红染色液染色35mi
。(4)水洗:用水洗去复红染液。(5)干燥:将染色片放空气中晾干。(6)涂黑素:在染色涂面左边加一小滴墨汁,用一边缘光滑的载玻片轻轻接触墨汁,使墨汁沿玻片后缘散开(夹角30度),然后推向另一侧,使黑素在染色涂面上成为一薄层,并迅速风干。(7)镜检:先低倍镜,再高倍镜油镜观察。
观察:背景、菌体、荚膜、细菌形态等,并绘图。观察:背景、菌体、荚膜、细菌形态等,并绘图。
5实验记录(绘图)实验记录(绘图)6思考题
荚膜负染法为什么不用热固定?荚膜负染法为什么不用热固定?为什么包在荚膜内的菌体着色,而荚膜不着色?为什么包在荚膜内的菌体着色,而荚膜不着色?
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