4微生物的实验室培养一、培养基1．概念人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。2．种类按照培养基的物理状态划分为液体培养基和固体培养基。3．营养要素各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。二、无菌技术1．获得纯净培养物关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下：1对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。2将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。3为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。4实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。2．消毒和灭菌1消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物不包括芽孢和孢子。常用的方法有煮沸消毒法和化学药剂消毒法。2灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物包括芽孢和孢子。常见的方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。三、大肠杆菌的纯化培养1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
最常用的细菌培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基配制步骤：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
2．纯化大肠杆菌1纯化培养方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌，最常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。2纯化培养的原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即获得较纯的菌种。3平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到
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f培养基的表面。其具体操作是：①将接种环放在火焰上燃烧，直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。③将试管口通过火焰。④将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三到五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。⑧将平板倒置放入培养箱中培养。4稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。其操作步骤是：①系列稀释梯度稀释操作：
②涂布平板操作：a．将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。b．取少量菌液，r