扩增效率难以控制但由PCR扩增的所有样本和参照物在不同的实验中差异很小。这种敏感的技术可用于其他低表达的基因定量217原位PCRi
situPCR技术原位PCR综合了PCR和原位杂交I
situhybridizatio
ISH的优点是一种在组织切片或细胞涂片上原位对特定的DNA或RNA进行扩增再用特异性的探针原位杂交检测。原位PCR标本一般需先经化学固定以保持组织细胞的良好形态结构。细胞膜和核膜有一定的通透性PCR扩增所需的各种成分可进入细胞内或核内在原位对特定的DNA或RNA进行扩增。扩增产物由于分子量较大或互相交织不易透过细胞膜
f向外弥散故保留在原位。这样就很容易应用ISH将其检出同时还可对目的DNA序列的组织细胞进行形态学分析。218免疫PCRimmu
oPCR技术抗原抗体反应与PCR技术的结合产生了免疫PCR，是目前为止最为敏感的检测方法理论上可测到一个抗原分子的存在。通过用一个具有对DNA和抗体双重结合活性的连接分子使作为标记物的DNA分子特异地结合到AgAb复合物上，从而形成AgAbDNA复合物，附着的DNA标记物可用适宜的引物进行PCR扩增。特异性PCR产物的存在证明DNA标记物分子特异地附着于AgAb复合物上，进而证明有Ag存在。吴自荣等将Ab通过化学交联剂直接连接到分子上构建成AbDNA探针组成免疫PCR检测新模式，具有高度灵敏和特异性。免疫PCR可对流行性传染病如肝炎、爱滋病等进行检测，检测体液中致癌基因和癌基因表达的微量蛋白等。219长片段PCRlo
gPCR技术长片段PCR是用高质量模板DNA保证其完整性引物应较长21～34bp，使用高的退火温度及错配率更低的酶，将无3’5’外切酶活性的DNA聚合酶和低浓度有3’5’外切酶活性的DNA聚合酶组合使用，缓冲体系通过提高Tris的浓度或改用Trici
e缓冲液以增强缓冲能力，并调高体系的pH。热循环参数总的来说需增加延伸时间，一般1kbmi
，同时采用热启动。长片段PCR在限制性片段多态性及单体型分析、染色体基因步移、DNA序列分析及基因突变的鉴定等方面得到应用。3PCR技术的应用31PCR技术在农业中的应用311PCR在转基因产品检测中的应用
目前，相关研究人员已经利用PCR技术成功建立了检测转基因马铃薯、大豆和玉米的技术路线，对转基因大豆和玉米的检测低限分别到达了1％和01％。312PCR在研究植作物生长发育方面的作用
植物的生长、发育、分化和衰老都涉及许多基因的时空顺序表达，因此研究这个过程中基因表达的变化是揭示生长发育机理的重要手段。定量RTPCR是研究植物基因表达水平变化的一项重要技术。通过研究不同植物或同意植物不同发育时期r