生粘连其中一条重组杂合链能在PCR条件下发生聚合延伸反应产生一个包含两个不同基因的杂合基因。212随机引物扩增技术arbitraryprimedPCRAPPCRAPPCR技术通过随意设计或选择一个非特异性引物在PCR反应体系中首先在不严格条件下使引物与模板中许多序列通过错配而复性。如果在两条单链上相距一定距离有反向复性引物存在则可经Taq酶的作用使引物延伸而发生DNA片段的扩增经一至数轮不严格条件下的PCR循环后再于严格条件下进行扩增。扩增的产物经DNA测序凝胶电泳分离后经放射性自显影或荧光显示即可得到DNA指纹图。APPCR用于肿瘤的抑制基因、癌基因的分离；菌种、菌株及不同物种的鉴定；遗传作图；不同分化程度或某些不同状态下的组织的基因表达差异等方面的研究。213差示PCRdiffere
tialPCRdPCR技术dPCR可以定量检测标本靶基因的拷贝数。它是将目的基因和一个单拷贝的参照基因置于一个试管中进行PCR扩增。电泳分离后呈两条区带比较两条区带的丰度或
f在引物5’端标记上放射性核素后通过检测两条区带放射性强度即可测出目的基因的拷贝数。214定量PCRqua
titativePCRqPCR技术qPCR技术是用合成的RNA作为内标来检测PCR扩增目的mRNA的量涉及目的mRNA和内标用相同的引物共同扩增但扩增出不同大小片段的产物可容易地电泳分离。一种内标可用于定量多种不同目的mRNA。qPCR可用于研究基因表达能提供特定DNA基因表达水平的变化在癌症、代谢紊乱及自身免疫性疾病的诊断和分析中很有价值。215竞争性PCRcompetitivePCRcPCR技术cPCR技术是竞争cDNA模板与目的cDNA同时扩增使用同样的引物但一经扩增后能从这些目的cDNA区别开来。通常使用突变性竞争cDNA模板其序列与目的cDNA序列相同不过模板中仅有一个新内切位点或缺少内切位点突变性的cDNA模板可用适当的内切酶水解并用分光计测定其浓度。cDNA目的序列和竞争模板相对应的含量可用溴化乙锭染色电泳胶直接扫描进行测定或掺入放射性同位素标记的方法测定。竞争模板开始时的浓度是已知的则cDNA目的序列的最初浓度就能测定。这种方法能精确测定mRNA中cDNA靶序列可用于几个到10个细胞中mRNA的定量。216半定量PCRsemiqua
titativePCRsqPCR技术sqPCR不同于cPCR的是参照物ERCC2的PCR产物与目的DNA的PCR产物相似并分别在试管中扩增。sqPCR的流程为样品和内参照RNA分别经反转录为cDNA然后样品cDNA和一系列不同量参照cDNA分别在不同管进行扩增PCR产物在琼脂糖凝胶上电泳拍照光密度计扫描作出标准曲线通过回归公式便可定量表达的基因量。虽然管与管之间的r