说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和
需要，对某些天然的载体进行人工改造。
②常见的标记基因有抗生素抗性基因、产生特定颜色的表达产物基因、发光基因等。
③作为载体必须具有一个至多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个。因为某种
限制酶只能识别单一切点，若载体上有一个以上的酶切点，则切割重组后可能丢失某些片
段，若丢失的片段含复制起点区，则进入受体细胞后便不能自主复制。一个载体若只有某
种限制酶的一个切点，则酶切后既能把环打开接纳外源DNA片段，又不会丢失自己的片段。
④注意与细胞膜上载体的区别，两者的化学本质和作用都不相同。
⑤质粒能自我复制，既可在自身细胞、受体细胞内，也可在体外。
2
f1．2010浙江卷，2在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，如下操作错误
的是

A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草原生质体
D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
考点113以流程图解决知识内在联系基因工程的操作步骤
1．基因工程的图解
1抗虫棉的培育过程
2基因工程技术生产凝乳酶的过程
2．基因工程的操作程序分析1目的基因的获取途径①从自然界已有的物种中分离出来，如从基因组文库或cDNA文库中获取。提醒cDNA文库只含某种生物的部分基因，相当于地方图书馆；基因组文库含该种生物的全部基因，相当于国家图书馆。②人工合成目的基因：常用的方法有化学合成法和反转录法。化学合成法：蛋白质—分—析→氨基酸序列—推—测→RNA碱基序列—推—测→DNA碱基序列—→用4种脱氧核苷酸人工合成目的基因反转录法：分离出供体细胞mRNA逆—转—录→酶单链DNADNA—聚—→合酶合成目的基因③PCR扩增技术与DNA复制的比较
相同原理点原料
PCR技术DNA复制碱基互补配对四种游离的脱氧核苷酸
DNA复制
3
f条方式件
模板、ATP、酶、原料、引物
解旋
DNA在高温下变性解旋
解旋酶催化
不同场所
体外复制PCR扩增仪
主要在细胞核内
点酶
热稳定的DNA聚合酶Taq酶
细胞内含有的DNA聚合酶
结果在短时间内形成大量的DNA片段
形成整个DNA分子
2基因表达载体的构建最核心步骤
①基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。
提醒a．与载体相比较，增加启动子、目的基因和终止子三个基因片段，其功能各不相同。b．启动子DNA片段≠起始密码子RNA；终止子DNAr