石蜡切片制备基本步骤
一、准备工作
(一)洗涤实验所需器皿:(玻璃器皿的清洗)
1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷
2、将器皿在自来水下冲洗干净
3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干
注:一般情况下,经以上步骤后,用蒸馏水洗过13次即可烘干备用,如果做特殊染色还需
浸泡在酸性清洁液内1224小时,再经自来水彻底冲洗,再用蒸馏水过洗13次烘干备用。
(二)配制:硫酸洗液的配制
清洁液(洗液)的配制:
成分
强酸液次强酸液弱酸液
浓硫酸(ml)1000
200
100
重铬酸钾(mg)63
120
100
蒸馏水(ml)200
200
1000
重铬酸钾1200g
蒸馏水
2000ml
将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中,边倒边用木棒轻轻搅拌
(三)载玻片与盖玻片的处理
1将所需载玻片与盖玻片清洗后,放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时
2流水冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍
395100酒精浸泡24小时,用绸布擦干备用
注:在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时,要一片片地投入,使其不致重叠。
二、常用液体的配制
(一)缓冲溶液:1.磷酸盐缓冲液A液:01molL磷酸二氢钠B液:01molL磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值(3:7≈PH70)2.枸椽酸缓冲溶液A液:01molL枸椽酸B液:01molL枸椽酸钠
fA液与B液按比例混合调整到所需的PH值(62:428≈PH62)
(二)固定剂:
1.甲醛:10甲醛
福尔马林100ml
蒸馏水
900ml
注:实际甲醛含量只有3640但习惯上都将其视为10。
2.10%中性福尔马林钙固定液
甲醛液10ml
蒸馏水90ml
加碳酸钙至过饱和以容器底部碳酸钙沉淀12cm厚为适度充分振荡混合后,放置24小时
取上清液使用。
3.4多聚甲醛:
8多聚甲醛
多聚甲醛8g
蒸馏水100ml
加温至60℃左右,不时搅拌,成为乳白色溶液。滴加1NNaOH,并不停搅动至液体清明。
1NNaOH
lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量
氧化钠NaOH;分子量=40.005,当量价=1
1NNa0H的配制方法为:m=40.005/1=40.005g。取40.005gNaOH溶解于1L蒸馏水
中
4多聚甲醛
8多聚甲醛
50ml
01M磷酸盐缓冲液50ml
PH72
先取50ml8多聚甲醛,用01M磷酸二氢钠和01M磷酸氢二钠将PH值调至72
4.Boui
液:
苦味酸饱和水溶液
75ml
36%40%福尔马林液25ml
冰醋酸
5m1
5.改良Boui
氏固定液
苦味酸饱和水溶液
45ml
95酒精
45ml
36%40%福尔马林液5ml
冰醋酸
5m1
6.Car
oy液:
冰醋酸10m1
f氯仿
30m1
无水乙醇60m1
以上三者临用前混合,预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。
(三)r