离心，加入5ml含10％胎牛血清的αMEM培养液，重悬，调整细胞浓度为1×104ml接种于6孔板内，37℃、50mlLCO2的孵箱中培养。
13牙周膜干细胞生物学特性的研究
131细胞生长曲线测定：分别取筛选培养的牙周膜干细胞及牙周膜细胞，以1×103cells孔接种于96孔塑料板，每组3孔，隔日换液。每天取一组，MTT法测各孔OD值，连续测10天，以时间为横轴、细胞数为纵轴绘制生长曲线。
132克隆形成率测定：将收集的对数生长期牙周膜细胞的培养上清1500rpm离心10mi
，经022μm直径的小滤器过滤后，与培养基以ll比例混合作为适应性培养基。取筛选培养的牙周膜干细胞，调整细胞密度至10～15个ml，100μ1孔接种于96孔培养板中，培养12h后标记单个细胞孔，并补液至200μ1孔，5天换液，光镜下观察克隆形成情况。
133流式细胞仪分析
1331细胞周期分析：取筛选培养的牙周膜干细胞，胰酶消化，调整细胞密度为1×107ml，PBS清洗2次，加入001molLPBS重悬，再加入预冷的无水乙醇2ml吹打混匀，4℃过夜，离心弃乙醇，001molLPBS清洗2次，加入5mlL碘化丙锭1ml，4℃30mi
，过300目的尼龙筛网，流式细胞仪上机，进行细胞周期检测。
1332表面抗原测定：取筛选培养的牙周膜干细胞弃去培养液，PBS清洗两次，以含025胰蛋白酶的PBS液消化5mi
，制成单细胞悬液，再以含2牛血清白蛋白和01偶氮钠的磷酸盐缓冲液流式缓冲液冲洗细胞调整细胞密度为30×109L，每个Eppe
dof管加100μL细胞悬液，室温下分别与CD44FITC、CD146FITC、CD34FITC、CD45FITC小鼠抗人单克隆抗体5μL避光孵育15mi
，再以流式缓冲液清洗细胞，1000rpm离心5mi
，将细胞重悬于含1多聚甲醛的流式缓冲液05ml固定。使用同型对照单克隆抗体确定背景标记。用流式细胞仪分析荧光细胞，专用配套软件计算细胞表面抗原阳性率，单位用表示。
1333免疫细胞化学染色：取筛选培养的PDLSCs制备细胞爬片，免疫细胞化学ABC法进行STRO1及Vime
ti
染色，阴性对照以PBS替代一抗，进行细胞来源及表达检测，光镜下观察。
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1334体外多向诱导分化：①矿化诱导：取筛选培养的牙周膜干细胞制成细胞悬液，调整细胞密度为2×104ml接种于6孔板中，以含10胎牛血清的αMEM培养24h后换矿化诱导液100μgml链霉素、100Uml青霉素、10mmolLβ甘油磷酸钠、50μgml维生素C、1×108molL地塞米松、10mlL胎牛血清、αMEM培养液培养，隔日换液。培养3周后吸弃培养液PBS清洗95酒精固定10mi
PBS清洗2次加入01茜素红Alizari
RedS室温染r