实验三细菌芽孢染色
13生物基地201300140059刘洋20141016同组者：吕赞刘沛余马华峥
一、实验器材
1菌种
枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）12d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物梭状芽孢杆菌（ClostridiumPrazmowski）12d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物
2溶液和试剂
5孔雀绿水溶液，05番红水溶液
3仪器和其他用品
酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹，滴管，无菌水等
二、实验目的
1学习并掌握芽孢染色法并了解芽孢的形态特征。2巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
三、实验原理
简单染色法适用于一半的微生物菌体染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如芽孢、荚膜和鞭毛，对他们进行观察前需要进行有针对性的染色。芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子（e
dospore），通常为圆形或椭圆形。是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石炭酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两者区别开来。
四、实验步骤
芽孢染色（SchaerfferFulto
氏染色法）1制片
f按常规方法涂片、干燥及固定
2加热染色
向载玻片滴加数滴5孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持5mi
，加热时注意补充染液，切勿让涂片干涸。
3脱色
待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。
4复染
用05番红水溶液复染2mi
。
5水洗
用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。
6镜检
将载玻片晾干后油镜镜检。
五、注意事项
1选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已破裂。2加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。3脱色必须等待玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。
六、实验结果及分析
番红被洗掉的枯草芽孢杆菌
f枯草芽孢杆菌
f菌体不明显的梭状芽胞杆菌
梭状芽胞杆菌
f七、结果分析
菌体均被染成绿色的原因可能是番红复染时间较短或者冲洗过度导致复染不完全。枯r