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包涵体蛋白3种纯化方法的比较
作者：柴燕涛姜棋予谢国明胡燕邬顺全杨锐创貌盼勇侯俊来源：《中国医药导报》2016年第10期
摘要目的比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型（EV71）VP1区包涵体蛋白的纯化效果。方法分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析（IMAC）及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71VP1包涵体蛋白进行纯化，蛋白垂直（SDSPAGE）电泳检测蛋白纯化效果。结果差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化，纯化效果较好，但存在蛋白损失较多，且纯化蛋白不能反复冻融的问题。IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高，且蛋白性状稳定，但仍存在纯化蛋白量较少的问题。饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白。结论差速离心法可用于大批量蛋白纯化，纯化蛋白应避免反复冻融，可小量分装冻存后备用。IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白，其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途。饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化。关键词包涵体蛋白；蛋白纯化；蛋白垂直电泳中图分类号R39233文献标识码A文章编号16737210（2016）04（a）000403AbstractObjectiveTocomparetheexpressedi
clusio
bodyprotei
ofEV71VP1withthreepurificatio
methodsMethodsTheexpressedEV71VP1i
clusio
bodyprotei
waspurifiedbydiffere
tialce
trifugatio
，IMACcolum
purificatio
a
dammo
iumsulfateprecipitatio
SDSPAGEexperime
tsdetermi
atethepurityeffectsResultsExpressedi
clusio
bodypurificatio
i
largequa
titiescouldbee
u
dertake
bydiffere
tialce
trifugatio
a
dthepurificatio
effectwasbetterbutwithalotofprotei
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a
dthawedThepurificatio
effectofIMACwasgooda
dstable，butlesspurifiedprotei
waspurifiedHighpurityofi
clusio
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was
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Co
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Differe
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，butavoidrepeatedlyfreezi
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methodsTheammo
iumsulfateprecipitatio
iso
lyapplicablefortheprelimi
arypurificatio
oftheexpressedprotei
sKeywordsI
clusio
bodyprotei
；Protei
purificatio
；SDSPAGEelectrophoresis包涵体是外源基因在细胞中表达量过高形成的一种膜包裹的高密度、不溶性蛋白颗粒。该蛋白不具有生物学活性，其分子的空间结构表现为非折叠态的聚集体，复性后可恢复其生物学活性1。研究发现外源基因低表达时很少形成包涵体，蛋r