附1真菌13βD葡聚糖检测标准操作规程
1目的
规范真菌13βD葡聚糖检测的操作规程,保证结果准确性。
2原理
实验条件下,来源于某些真菌细胞壁的13βD葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的
酶促凝集系统,使反应溶液的透光度发生变化。利用13βD葡聚糖标准品建立βD葡聚糖生物效
应与透光度变化关系的标准曲线,便可定量地测定人血液的13βD葡聚糖含量。
3试剂
真菌(13)βD葡聚糖检测试剂盒,湛江安度斯生物有限公司。
试剂盒包装规格:20人份盒。
试剂盒组成:
βG试剂
冻干粉状,025ml支,10支
βG试剂复溶液
无色液体,03ml支,10支
样品稀释瓶
无色液体,09ml支,20支
复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。若当次试验有剩余,可将剩余的试剂溶液置20℃以下
冷冻保存,一周内使用。不能反复冻融试剂溶液。
4检测设备:LKM动态试管检测仪。
5实验用具:250μl无热原吸头、20200μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、
无热原真空采血管(肝素抗凝剂)。
6标本采集及送检要求
61标本采集要求
611采集过程要求无菌操作,用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管;
612常规住院病人早上用药前空腹采血,血透患者透析前采血。
62标本的送检和保存要求
标本采集后应在半小时内离心,4小时内检测完。若当日不能及时检测的标本应将离心后的血
浆转移至无β葡聚糖的容器内20℃以下冷冻保存,一周内使用。
7实验操作
71在试验开始前,先开启LKM动态试管检测仪,预热,一段时间后发出哔的一声,试管仪温度
达到37℃,待用;
72取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1~2ml,以400g离心10分钟;
73取富含血小板的血浆100μl,加到样品稀释瓶中,在旋涡混合器上轻轻混匀,然后插入75℃
试管恒温仪中加热10分钟;
74加热10分钟后,将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出,使其降至室温即可,即为110稀
释的样品供试溶液;
75取βG试剂1支,开启;
76取βG试剂复溶液1支,开启后用移液器取025ml加入βG试剂中,轻轻摇匀,澄清后得试
剂溶液备用;
附11
f77打开检测软件连接LKM动态试管检测仪,进入临床检查采集数据界面,点击“开始”按钮,使
检测软件进入待采集状态;
78取本试剂盒所配的专用反应试管,先取已制备好的样品供试溶液100μl加入反应试管中,然
后加入50μl试剂溶液,每个样品供试品溶液平行两管;
79加样完毕,依次拿起试管在旋涡混合器上轻点r