底端出口，移去层析柱上端出口塞，缓慢打开层析
柱底端出口，小心使层析柱内液体流至层析柱床体表面时，立即关闭出口。
用移液枪吸取05mL样品液沿柱内壁缓慢加入柱中，以免冲坏树脂表面。加
样完毕后，慢慢打开层析柱底端出口，使液面降至与树脂表面相平处关闭。吸取
少量缓冲液冲洗柱内壁数次，加缓冲液至液层34cm左右，接上恒流泵。加样时
应注意避免冲破树脂表面，避免将样品全部加在某一局限部位。
6、洗脱
以柠檬酸缓冲液洗脱，洗脱流速24mLh，每管4mL，10mi
一管（试管收集
前提前编号）。
7、测定
分别取各管洗脱液1mL，各加入茚三酮显色剂1mL，混合后沸水浴5mi
，冷
却，各加01CuSO4溶液3mL混匀，测定570。以吸光度值为纵坐标，洗脱液
累计体积（每管4mL，故4mL为一个单位）为横坐标绘制洗脱曲线。
四、实验结果
1、吸光度测定结果
试剂0
mL
样液
缓冲液10
05茚10
三酮
01Cu30
SO4
5700000
试剂7
mL
样液
10
缓冲液
05茚10
三酮
01Cu30
SO4
5700101
2、洗脱曲线
1
2
3
4
5
6
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
30
30
30
30
30
30
0015
0439
0885
0041
0089
0090
8
9
10
11
12
13
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
30
30
30
30
30
30
0104
0084
0138
0111
0122
0094
f按要求绘制洗脱曲线得：
洗脱曲线
570
1
09
0885
08
07
06
05
0439
04
03
02
0138
0101
0089
0122
01
0015
0
0
010000
4
8
12
0041
16
0104
0090
20
24
28
32
0111
0084
36
40
44
0094
48
52
56
洗脱液累计体积mL
五、分析与讨论
1、由洗脱曲线可大致看出由两个洗脱峰：
第一个峰出现在约12mL时，这个峰形状较明显，峰窄而高，上升和降落都
较为陡峭判断应为Asp的洗脱峰。因为Asp的pI为297，pH53时Asp带负电
荷受阳离子交换树脂的磺酸基团排斥下，优先洗脱出来。由于受到静电排斥力的
作用，Asp的洗脱较快且较为集中，故峰形状窄而高。
第二个峰出现在约40mL时，这个峰较为平坦，难以区分。从洗脱曲线可以
看出，从20到52mL，吸光度的变化不大，且在48mL处还出现了小起伏，很难
判断峰出现在何处。第二个峰应为Lys的洗脱峰，Lys的pI为974，pH为53
时Lys带正电荷，与树脂的磺酸基团亲和力较高，故在通过树脂时，会被树脂吸
附。之后在洗脱液的冲洗下逐渐与树脂脱离从而洗脱出来。推测：因为促使Lys
洗脱的只有重力和洗脱液的冲击，而不像Asp那样有静电斥力，所以洗脱较为缓
慢，所以峰平坦而r