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外,分析柱的填充剂粒径一般在3~10μm之间。粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。
使用微径柱时,输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配如有必要,色谱条件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争议时,应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃,为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度,但不宜超过60℃。
流动相的pH值应控制在28之间当pH值大于8时,可使载体硅胶溶解当pH值小于2时,与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用pH值大于8的流动相时,应选用耐碱的填充剂,如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有机一无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等当需使用pH值小于2的流动相时,应选用耐酸的填充剂,如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂,或有机一无机杂化填充剂等。112检测器最常用的检测器为紫外可见分光检测器,包括二极管阵列检测器,其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
紫外可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器,其响应值不仅与待测溶液的量有关,还与化合物的结构有关;蒸发光散射检测器和示
f差折光检测器为通用型检测器,对所有的化合物均有响应,结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。
紫外可见分光检测器、荧光检测器、电化学和示差折光检测器的响应值与待测溶液的浓度在一定范围内呈线性关系,但蒸发光散射检测器的响应值与待测溶液的浓度通常呈指数关系,故进行计算时,一般需经对数转换。
不同的检测器,对流动相的要求不同。如采用紫外可见分光检测器,所用流动相应符合紫外一可见分光光度法《中国药典》2015年版四部通则0401项下对溶剂的要求;采用低波长检测时,还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长,并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发性盐组分的流动相。113流动相反相色谱系统的流动相常用甲醇一水系统和乙腈水系统,用紫外末端波长检测时,宜选用乙腈水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐,如需用时应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时,流动相中有机溶剂一般不低于5,否则易导致柱效r
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