蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avia
myeloblastosisvirusAMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（molo
eymuri
eleukemiavirusMMLV）反转录酶。在完成逆转录过程之后通过PCR进行定量分析的时候，随着技术的发展，realtimePCR（实时荧光PCR）或ddPCR（数字PCR）技术也被用来做定量分析，它们比普通PCR进行定量分析时灵敏度更高，定量更精确。2RealtimePCRRealTimePCR技术，又称实时定量荧光PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。定量PCR已经从基于凝胶的低通量分析发展到高通量的荧光分析技术，即实时定量PCR。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国AppliedBiosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时定量PCRrealtimequa
titativePCR是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。适用性和特点：1、具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好，特异性更高。2、适用于扩增序列专一的体系的检测。3、样品中靶基因含量过低的定量PCR检测。4、靶基因的特异序列较短，无论怎样优化引物设计条件都不能解决。5、存在与靶基因同源的序列，在PCR中容易出现非特异性扩增，对特异性要求较高的定量。6、广泛用于人类传染病的诊断和病原定量在动物病原体基因的检测畜禽产品的检验检疫生物制品的鉴定。3Mutage
esisPCR4Prokaryoticexpressio
system
f原核表达系统：在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是原核表达系统，这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体一般为质粒转化细菌通常选用的是大肠杆菌，通过IPTG诱导并最终纯化获得所需的目的蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物，而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点：如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控，有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用，过量表达可能导致非生理反应，目的蛋白常以包涵体形式表达，导致产物纯化困难；而且原核表达系统翻译后加工修饰体系r