中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断;⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位;⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型;
f⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的;⑸发现微小转移灶,有助于临床治疗方案的确定,包括手术范围的确定。⑹为临床提供治疗方案的选择。3Wester
Blotti
g蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Wester
Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。蛋白免疫印迹Wester
Blot是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。基本原理:与Souther
Blot或Norther
Blot杂交方法类似,但Wester
Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。4Immu
oprecipitatio
免疫沉淀是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与蛋白AG(Protei
AG)或二抗偶联的agarose或Sepharose珠子孵育,通过离心得到珠子蛋白AG或二抗抗体目的蛋白复合物,沉淀经过洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸510mi
,在高温及还原剂的作用下,抗原与抗体解离,离心收集上清,上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。优点(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点(1)r