转录为
cDNA才能进行扩增。应用非常广泛无论是分子生物学还是临床检验等都经常采用。
（5）巢式PCR技术NESTPCR：先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量然后再用一对内引物扩增以得到特异的PCR
带此为巢式PCR。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式PCR。为减少巢式PCR的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些且用量较少同时在第一次PCR时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度这样在第一次PCR时由于较高退火温度下内引物不能与模板结合故只有外引物扩增产物经过若干次循环待外引物基本消耗尽无需取出第一次PCR产物只需降低退火即可直接进行PCR扩增。这不仅减少操作步骤同时也降低了交叉污染的机会。这种PCR称中途进退式PCR，主要用于极少量DNA模板的扩增。
（6）多重PCR技术multiplexPCR：在同一反应中用多组引物同时扩增几种基因片段如果基因的某一区段有缺失则相应
的电泳谱上这一区带就会消失。主要用于同一病原体的分型及同时检测多种病原体、多个点突变的分子病的诊断。
（7）重组PCR技术：重组PCR技术是在两个PCR扩增体系中两对引物分别由其中之一在其5’端和3’端引物上带上一段
互补的序列混合两种PCR扩增产物经变性和复性两组PCR产物互补序列发生粘连其中一条重组杂合链能在PCR条件下发生聚合延伸反应产生一个包含两个不同基因的杂合基因。
1华中科技大学同济医学院
fＰＣＲ技术
业精于勤而荒于嬉行成于思而毁于随
（8）原位PCR技术：利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的片段在不破坏细胞的前提下利用一些特定的
检测手段来检测细胞内的扩增产物。直接用细胞涂片或石蜡包埋组织切片在单个细胞中进行ＰＣＲ扩增，可进行细胞内定位，适用于检测病理切片中含量较少的靶序列。
（9）荧光定量实时PCR技术
反应动力学
PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升，最终DNA扩增量可用Y1X
计算，Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平均每次的扩增效率，
表示循环次数。平均扩增效率理论值为100，但实际情况达不到，反应初期靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应”，此效应称平台期，与DNA聚合酶数量和活性、PCR扩增效率、非特异性产物的竞争等因素有关。
PCR扩增产物
可分为长产物片段和短产物片段两部分，短产物片r