农杆菌介导的植物转基因技术
一、实验目的
1了解低温离心机、恒温振荡培养箱、超净工作台等仪器的使用。2学习真核生物的转基因技术及农杆菌介导的转化原理；掌握农杆菌介导转化植物的实验方法，了解转基因技术的操作流程。
二、实验原理
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤。农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将TDNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的TDNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。
实验一培养基配制
一、仪器和试剂
1、仪器：高压灭菌锅，超净工作台2、药品：Beefextract牛肉浸膏5gL，Yeastextract酵母提取物1gL，Pepto
e蛋白胨5gL，Sucrose蔗糖5gL，MgSO47H2O04g100ml，Agar琼脂15g100ml，MS粉，有机溶液，肌醇，Fe盐，NAA（萘乙酸），6BA（6苄氨基腺嘌呤），卡那霉素（ka
），利福平（rif），链霉素（str）。
二、实验方法
第一组配制YEB固体培养基
1、配制250mlYEB固体培养基：先称取125gBeefextract牛肉浸膏；125gPepto
e蛋白胨；025gYeastextract酵母提取物；125gSucrose蔗糖；1g
fMgSO47H2O；琼脂粉375g；将上述药品置于250ml三角瓶中，用量筒称取200ml蒸馏水将其溶解混匀，然后再定容至250ml，用NaOH调pH74。2、灭菌：将盛有250ml培养基的三角瓶封口，在三角瓶表面写清培养基名称，用高压灭菌锅进行灭菌。3、抗生素的加入：高压灭菌后，待培养基温度降到5060℃时（手可触摸）加入已经过滤好的抗生素（100μgmlka
50μgmlStr50μgmlrif），以免温度过高导致抗生素失效。4、倒板：将抗生素与培养基混匀，每个平皿倒15ml培养基，可以倒16个平皿，倒完后打开平皿盖，在紫外灯下照10mi
，等待培养基凝固，盖上平皿盖，封口备用。
第二组配制YEB液体培养基
1、配制500mlYEB液体培养基：先称取25gBeefextract牛肉浸膏；25gPepto
e蛋白胨；05gYeastextract酵母提取物；25gSucrose蔗糖；2gMgSO47H2O；将上述药品置于500ml三角瓶中，用量筒称取450ml蒸馏水将其溶解混匀，然后再定容至500ml，用NaOH调pH74。2、灭菌：将盛有500ml培养基的三角瓶封口，在三角瓶表面写清培养基名称，用高压灭菌锅进行灭菌。3、抗生素的加入：高压灭菌后，待培养基温度降到5060℃时（手可触摸）加入已经过滤好的抗生素（100μgmlkar