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第四部分浅尝现代生物技术实验12乳酸脱氢酶同工酶的分离
一、乳酸脱氢酶
1.简称:____
2.作用:在____________存在下,乳酸脱氢酶能使______产生________,具体反应式
见下:
________________________________________________________________________。
答案:1LDH
2.氧化型辅酶NAD+乳酸丙酮酸CH3-CHOH-COOH+NAD+LDHCH3-CO-COOH+NADH+H+
乳酸
丙酮酸
二、同工酶1.概念:指能____________,但其________________的一组酶。2.实例:LDH有____种同工酶。3.LDH同工酶:结构特点:由____种亚基____和____以不同比例组成的________。具体类型:______、______、______、______和M4。存在特点:在动物的________________中,LDH各种同工酶的______不同。答案:1催化同一化学反应酶蛋白的分子组成不同2.53.2LM四聚体H4H3MH2M2HM3细胞分化及胚胎发育过程比例
三、乳酸脱氢酶同工酶的分离实验1.实验方法:____________法。2.染色:1方法:________法2染色原理:在LDH的作用下,NAD+被还原为NADH,NADH将______和______传递给甲硫吩嗪PMS,还原的甲硫吩嗪再将______和______传递给氯化氮蓝四唑NBT,还原的氮蓝四唑呈____色,展现在电泳凝胶上。3.实验材料:牛的______,其余略。
1
f4.实验步骤:制备________↓加样↓________↓________
答案:1聚丙烯酰胺电泳2.1活性染色2电子H+电子H+蓝3.血清4.电泳凝胶板电泳染色
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