草菇基因组DNA提取方法
1收集菌丝（可提前几天收集）。用滤纸吸干菌丝，包裹于做好标记的锡箔纸中，迅速扔进液氮中，等所有菌丝收集完毕后，用镊子将样品从液氮中取出，保存于80℃冰箱备用。2称取0102g滤纸吸干、包于锡箔纸、冷冻保存的菌丝。用液氮研磨，在粉末融化前将粉末快速转入用液氮预冷的15mL离心管中，快速盖上离心管盖子，扔进液氮中备用（继续研磨下一个样品，快速装进离心管后迅速扔进液氮保存）。3用镊子将离心管从液氮中夹出，放在96孔板，快速往离心管中加入400ul提取缓冲液（SDEB），立即涡旋混匀直到变成匀浆（一个一个加样，避免加样前，离心管中的粉末已经融化，涡旋震荡加用手弹使粉末充分溶于SDBE）。（此时开启离心机，4℃预冷）4往离心管中加入400ul2XcTAB缓冲液（2XcTAB）。5在通风厨中，往离心管中加入250ul苯酚，250ul氯仿异戊醇241，室温涡旋5分钟。613000rpm，4C，离心5分钟。（此时可以收拾清洗研钵、收拾擦干桌面）7小心吸取650ul上清，转移到一个干净的15毫升管中千万不要吸到任何苯酚或分层处的东西。8往上清液中加入455ul（07倍体积）的异丙醇，上下颠倒混匀10次。913000rpm，4C，离心10分钟。（此时可以继续收拾清洗研钵、收拾擦干桌面）10用手倒掉上清，13000rpm，4℃，离心10秒，用200ul的黄色枪头将离心管中残余的上清弃除。11往离心管沉淀中加入900ul70乙醇，用手指弹一弹使白色沉淀悬浮（备选：可放置20℃冰箱放置12h，休息一下，或者去吃饭）。1213000rpm4C，离心10分钟。（此时可以打开55℃水浴锅）13用1mL蓝色枪头轻轻吸走上清，注意不要把白色沉淀吸走了（千万不能用手把上清倒掉，一定要用枪轻轻吸）。备选：可重复1113一次。1413000rpm，4℃，离心10秒，用200ul的黄色枪头将离心管中残余的上清弃除。15在通风厨中，打开离心管盖子，放在96孔板上，让96孔板板面与通风厨台面成90度直角，放置10mi
不要太久，没有酒精味了即可。（此时可以先配置含130150浓度RNase的TE，再制备1琼脂糖凝胶）16往离心管中加入50100ul含有RNase酶的TE55℃水浴30分钟。17将溶解后的DNA暂存于冰上，用微量测定仪测DNA浓度和纯度，跑1脂糖凝胶检测DNA质量。Buffers2xCTAB2CTAB100mMTrisHClpH8020mMEDTApH8014MNaCl1PVPpolyvi
ylpyrrolido
eSoilDNAextractio
buffer
f100mMNaCl50mMEDTA025MTrisHCl5SDSGe
omicDNAextractio
Powder0105gfreezedriedorfreshmyceliumAdd400ulSoilextractbufferAdd400ul2xCTABbufferAdd500ulPhe
olChlorophormisoamylalcohol25241Vortexfor5mi
RTCe
trifuge13000rpmr