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架上,使滤纸一端的长边与支架前沿对齐,另一端浸入电极缓冲液内。用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱逐气泡,使滤纸的一端能紧贴在膜支架上。滤纸条是两个电极槽联系醋酸纤维素薄膜的桥梁,故称为滤纸桥。

点样:
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f生化实验报告
取新鲜血清于载玻片上,将盖玻片掰呈适宜大小,使一边小于薄膜宽度。把浸泡好的可用的醋酸纤维素薄膜取出,用滤纸吸去表面多余的液体,然后平铺在滤纸上,将盖玻片在血清中轻轻划一下,再在膜条一端152cm处轻轻地水平落下并迅速提起,即在膜条上点上了细条状的血清样品,呈淡黄色。

电泳:用镊子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上点样
面朝下、另一端平贴在阳极端支架上用镊子将其中气泡赶出。要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直,中间不能下垂。盖上电泳槽盖。接好电路,调节电压到90V,预电泳10mi
,再调电压至110V,电泳时间50mi
~1h。

染色:
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f生化实验报告
将染液倒入大培养皿中,电泳完毕立即用镊子取出薄膜,直接浸入染色液中,染色9mi
,然后取出。

漂洗:配制好漂洗液,将染色完毕的薄膜自染液中取出,直接放入漂洗
液中,连续更换几次漂洗液,直到薄膜背景几乎无色为止。

透明:配制好透明液,用镊子将薄膜取出,贴在容器壁上(烧杯壁或培
养皿上等),注意不可有气泡,用吹风机稍吹干薄膜,用胶头滴管淋洗薄膜,将每组20ml透明液淋洗玩即可,再用吹风机将薄膜彻底吹干,此时薄膜透明,小心将薄膜自容器壁上取下。
六、注意事项
1点样应细窄、均匀、集中。点样量不宜过多,点样位置要合适。2两电泳槽内缓冲液面应在同一水平面,否则会因虹吸影响电泳效果。3醋酸纤维素薄膜一定要充分浸透后才能点样。点样后电泳槽一定要密闭。电流不宜过大,以防止薄膜干燥,电泳图谱出现条痕。
七、实验结果
染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。从正极端起,依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。下面是通过本次实验获得的一条电泳带:
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f生化实验报告
八、结果分析
本次实验得到的电泳带从效果来看不是太好,主要的问题有以下几个:1有些电泳带参差不齐;2个别电泳带的两条带之间界限不明显;分析可能导致实验失败或误差的原因有以下几点:1将薄膜表面吸干时吸的太干或吸的不完全。因为点样时应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免缓冲液太多引起样品扩散。但也不能吸得太干,太干则样品不易进入薄膜的网孔内,而造成电泳起始点参差不齐,影r
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