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1mi
~2mi
,制成110的样品匀液。(2)液体样品:以无菌吸取25mL预处理样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。(3)用1mL无菌吸管或微量移液器吸取110样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管
f反复吹打使其混合均匀,制成1100的样品匀液。(4)按(3)操作程序,制备10倍系列稀释液样品匀液,每递增稀释一次,换用一次1mL无菌吸管或吸头。(5)根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液加入两个无菌平皿内。同时分别取1mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。(6)及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。2培养(1)琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。(2)如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按(1)条件进行培养。3菌落计数
可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colo
yformi
gu
its,cfu)表示。
选取菌落数在30cfu~300cfu之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数,大于300cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
平板内如有链状菌落生长时菌落之间无明显界线,则应将每条链(不同来源)作为一个菌落计。
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值再将平均值乘以相应的稀释倍数,作为每gmL中的菌落总数结果。
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按下列公式计算:
N∑C
101×
2×d
N:样品中的菌落数;∑C:平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;
f
1:第一个适宜稀释度的平板数;
2:第二个适宜稀释度的平板数;d:稀释因子(第一稀释度)。若所r
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